14ELISA方法检测HDVIgM抗体.docVIP

标题：ELISA方法检测HDV-IgM抗体 版本号：A 修订号：0 文件编号：XXX-MY-SOP-002 发布日期：2006年06月06日 生效日期：2006年07月01日 发布部门：管理层 编制人：XXX 审核人： XXX 批准人（签字）： XXX 页码：第 页 ， 共 页 一.目的 本SOP规定了HDV-IgM抗体酶联免疫吸附实验的程序和相 应的操作. 二.范围 HDV-IgM抗体检测 三.责任 实验室操作人员严格按要求执行。 四.定义 无 五.背景 为使实验结果准确无误，需要技术员从第一步开始就按标准操作进行。 六.程序 本程序适用于丁型肝炎病毒抗体（HDV-IgM）诊断试剂盒 (一).设备和材料 酶标仪: KHB ST-360 洗板机: KHB ST-36W 精确移液器:单通道可调移液器40-200ul一支 单通道可调移液器5-40ul一支 高品质蒸馏水 (二).试剂配制 1.使用前将试剂盒从冰箱中取出,室温放置30分钟. 2.将50ml浓缩洗涤液用蒸馏水稀释20倍备用。 （三）.操作流程 1.将微孔条固定于支架,按顺序编号(每板设阴阳性对照各两孔空白一孔)将待测样品用生理盐水1:10稀释. 2.用加样器每孔加入100ul样本稀释液（阴阳性对照孔直接加入100ul血清），将稀释样本各取10ul加入反应孔内（阴阳性对照孔除外），轻拍混匀。 3. 置37℃温育30分钟，洗板后扣干每孔加入2滴（100ul）酶标试剂。 4.置37℃温育30分钟，洗板后扣干每孔加入显色剂A .B各１滴轻拍混匀，37℃避光显色10分钟。 5.每孔加入终止液一滴（50ul）轻摇混匀，用酶标仪（450/630nm）测定各OD值。 （四）结果判定 临界值（CO）=2.1×阴性对照值（阴性对照孔OD值低于0.05时以0.05计算） 样品OD值S/C O≥1者为阳性 样品OD值S/C O1者为阴性 （五）注意事项： 1．试剂盒从冷藏环境中取出时应平衡至室温方可使用，未用完的微孔条须密封保存。 2．每板应设置空白对照一孔（不加样品及酶标试剂，其余各步相同），阴阳性对照各孔。 3． 洗涤液可用蒸馏水或去离子水配制，洗涤时各孔均需加满洗液，防止孔口内有游离酶不能洗净。洗板机应设定30-60秒浸泡时间。 4．操作应按说明书严格进行，不同批次试剂不得混用。 （六）完成实验 1．处理废弃物按照“传染病检测实验室安全管理作业指导书”要求进行。 2．清理消毒工作区。 3．关闭设备，为下次实验做好准备。 （七）记录 1．所有实验的原始记录存档。 2．所有记录应规范登记在册。 七．复查和修订 每年复查，修订一次 八. 参考文件 HDV-lgm抗体检测断试剂盒说明书 九.相关文件 无 十.附件 无