2012CB720600G基于核酸的重大疾病诊断新策略和新技术研究.pdfVIP

  项目名称： 基于核酸的重大疾病诊断新策略和新技 术研究 首席科学家： 周翔 武汉大学 起止年限： 2012.1-2016.8 依托部门： 教育部 1      一、关键科学问题及研究内容 1. 拟解决的关键科学问题 本项目拟解决以下三个科学问题： (1) 研究癌基因、DNA 甲基化基因和突变基因的结构和生物学规律，比较它 们在疾病和正常细胞中的差异。 (2) 解决核酸探针在疾病诊断中的特异性问题，设计、合成和筛选能特异性 识别疾病基因靶点和多位点突变基因的探针分子。 (3) 核酸适配子的高选择性灵敏诊断问题。通过化学方法修饰核苷序列或碱 基而形成的结构多样性核酸适配子对肿瘤标志物和CTC特异性的识别可以大大 提高，从而提高肿瘤疾病检测的灵敏度。 2 ．主要研究内容： 围绕上述三个科学问题，我们将开展如下几个方面的研究： 2.1 致病基因结构与生物学功能研究 核酸分子的生物学功能由其性质、结构和它们与其它生物大分子的相互作用 所决定。以富G核酸的特殊性质为基础，建立模拟基因组DNA复杂结构下G- 四链 体结构和构象的解析、示踪和干预的新技术，筛选和鉴定与富G核酸、G- 四链体 相互作用的小分子。发展上述过程的干预手段，为重要疾病提供诊断和治疗的理 论基础。 (1) 研究生理条件下富G核酸和G- 四链体等高级结构的形成条件，以及表现 出与疾病相关的性质。 (2) 发展解析生理条件下富G核酸和G- 四链体等高级结构构象的技术，为研 究小分子探针与富G核酸和G- 四链体的相互作用提供技术支撑。 (3) 筛选、鉴定与富G核酸和G- 四链体相互作用的化学小分子，研究小分子 在生理条件下与富G核酸和G- 四链体的相互作用、选择性识别及其生物学功能， 为疾病诊断和治疗提供理论基础。 (4) 富G核酸结构损伤检测与损伤识别修复机制，认识致病核酸的结构，寻 找与疾病相关的核酸序列。 2.2 针对致病基因的高灵敏、特异性小分子的设计与合成 2    针对癌基因、甲基化DNA 、不规则核酸序列等致病基因的一级、二级和三 级结构的特点，研究化学小分子与它们之间的相互作用，筛选出结合能力强、选 择性高的化学小分子： (1) 以富含G 核酸序列为靶点（例如，VEGF 、BCL-2 、Ki-ras 癌基因启动 子区和端粒DNA 富G 序列），设计合成和筛选具有识别功能的新型识别分子, 如： 氧氮杂环类大环和新型环状寡聚酰胺。在分子、细胞和动物水平上研究识 别分子对上述癌基因启动子区G- 四链体识别的特性和功能。 (2) 针对DNA 甲基化的基因靶点，主要是寻找能直接与甲基发生化学反应 的小分子，可以达到识别DNA 甲基化的基因序列的目的。 2.3 分子探针对癌基因、甲基化DNA 和致病基因的识别与调控 (1) 以癌基因、突变基因和不规则核酸结构为靶点，基于化合物的特征性结 构， 研究小分子配体与特殊核酸结构的亲和作用，设计筛选出对致病基因序列 具有特异的高亲和性化合物，进行光、电、色等功能化基团修饰制备分子探针； 在分子水平上理解其作用机制，揭示小分子-核酸间的结构功能关系，在分子水 平上理解其相互作用的特异性。结合细胞生物学，研究病变细胞和正常细胞修饰 电极对特定探针的响应及响应的异同点。 (2) 在得到设计合成的探针后，针对DNA 甲基化的基因靶点，利用现有小 分子的光或电或色响应等性质，直接与相关的DNA 甲基化序列作用，通过相关 的响应来检测DNA 甲基化序列. 在细胞水平上， 我们可以通过利用DNA 微阵 列技术和PCR 技术分析合成的探针分子处理细胞前后基因表达的差异变化，从