CDC25B1对人胰腺癌细胞株Puta8988的生物学行为的影响.pdfVIP

CDC25B 对人胰腺癌细胞株Puta8988 的生物学行为 1 的影响1 肖志，石欣，杨正平，张齐，孔波，严伟，葛梓 东南大学附属中大医院普外科，南京（210009 ） E-mail：xiaozhiyuanyuan@ 摘 要： 目的：探讨CDC25B 基因在人胰腺癌细胞株Puta8988 中的表达情况，并将真核表 1 达重组载体 pcDNA-CDC25B1 转染至细胞中，观察它对细胞生物学行为的影响，以了解 CDC25B1 基因在细胞周期及胰腺肿瘤细胞恶性转化方面的作用，为研究胰腺癌的发病机制 与治疗提供理论依据。 方法：利用Lipofectamine2000 将CDC25B1 转染至人胰腺癌细胞株 Puta8988 中，通过RT-PCR 和Western blot 在mRNA 和蛋白水平验证质粒转染成功，通过 MTT 实验、侵袭实验和细胞周期检测，观察CDC25B 对细胞生物学行为的影响。 结果： 1 RT-PCR 发现在胰腺癌细胞株Patu8988 和转染空载体的细胞株中CDC25B1 在mRNA 水平表 达很弱；转染 pcDNA-CDC25B1 组中 CDC25B1 高表达。Western blot 发现胰腺癌细胞株 Patu8988 中，CDC25B 蛋白有少量表达；转染pcDNA-CDC25B1 组 CDC25B 蛋白高表达。 MTT 实验显示，转染pcDNA-CDC25B1 组细胞生长在72h 受到明显抑制。侵袭实验结果： 转染pcDNA-CDC25B1 的细胞其穿透Matrigel 胶的能力明显增强 (P0.05)。流式细胞计量术 显示，转染了 pcDNA-CDC25B1 组中，G1 期的细胞明显增多 (P ＜0.05); 同时在转染了 pcDNA-CDC25B1 组中，G2 期的细胞明显减少，与未处理组比较有统计学意义(P ＜0.05) 。结 论：在胰腺癌细胞株Patu8988 中的CDC25B1 转录水平很弱，存在CDC25B 蛋白表达。转染 的CDC25B 基因提高CDC25B 蛋白的表达，使细胞停滞在G1 期，对细胞的生长有抑制作 1 1 用，但能够增强细胞的侵袭能力；CDC25B1 可能不是通过单一的调控细胞周期而实现其对 细胞的影响，还存在其它多种途径。 关键词：CDC25B 基因，基因转染，胰腺癌细胞株Patu8988 中图分类号：R730.231 1. 引言 哺乳动物动物中 CDC25 家族一共包括三种同源异构体（CDC25A、CDC25B、CDC25C ）， 是一组在细胞周期调控中发挥巨大作用的苏/酪氨酸双功能酶[1] 。近年来发现 CDC25B 基因 是一种潜在的癌基因[2]，在许多肿瘤的发生和发展中起到重要作用。现在发现了 3 种 CDC25B 蛋白（CDC25B1、CDC25B2、CDC25B3 ），三种剪切体有约 95.5%的序列是一致的。我们 的前期研究表明在胰腺癌组织中 CDC25B 的 mRNA 和蛋白水平都明显上调[3]，同时我们发 现在不同的细胞株中 CDC25B 的 mRNA 和蛋白表达水平也是有差异的；为了进一步探讨 CDC25B1 的作用，我们将已经构建好的真核表达重组载体 pcDNA-CDC25B1 转染胰腺癌细 胞株 Patu8988 ，观察其对胰腺癌细胞株的生物学行为影响，同时也为阐明 CDC25B 与胰腺 癌之间的关系提供基础。 2. 材料与方法 2.1 材料 胰腺癌细胞株Patu8988为东南大学临床医学院中心实验室所保存。细胞培养所需之培养 基、胎牛血清、胰酶等均为Gibcol公司产品。细胞总RNA 的提取Trizol试剂盒为Invitrogen公 司产品。引物合成由上海生工公司合成。RT-PCR试剂盒为Takara公司产品。兔抗人CDC25B 1本课题得到国家自然科学基金）的资助。 - 1 -