HPV16E7siRNA表达载体对宫颈癌CaSki细胞增殖及成瘤性的影响.pdfVIP

现代妇产科进展 2007年 3月第 16卷第 3期 　Prog Ob stet Gynecol,M ar. 2007, Vo l16,No3 ·论著 · HPV 16 E7 siRNA 表达载体对宫颈癌 CaSki 细胞增殖及成瘤性的影响 王丹青 ,彭芝兰 ,尹如铁 ,牛晓宇 (四川大学华西第二医院妇产科 ,成都 　6 1004 1) 　　【摘要 】　目的:通过载体介导的 RNA 干扰技术干扰 E7癌基因的表达 ,探讨 HPV 16 E7 ( ) 小干扰 RNA siRNA 表达载体对宫颈癌 CaSk i细胞增殖及成瘤性的影响 , 以及成为宫颈癌 基因治疗新策略的可行性 。方法 :利用脂质体将 HPV 16 E7特异性 siRNA 表达载体 、空载体 转染 CaSk i细胞 ,分别命名为 CaSk iS、CaSk iP。通过荧光定量 RTPCR 及流式细胞仪检测 CaSk i、CaSk iS、CaSk iP 3种细胞 E7 mRNA 和蛋白的变化 ,通过流式细胞仪及 M TT法检测 3 种细胞的细胞周期及生长曲线变化 ,并检测 3种细胞在裸鼠体内成瘤性及生长活性的差异 。 结果 :荧光定量 RTPCR 及流式细胞仪检测显示 , CaSk iS细胞 E7基因 mRNA 和蛋白的表达 明显低于 CaSk i细胞 ,抑制率分别为 92. 86% 、84. 2 1% 。M TT法检测显示 , CaSk iS细胞生长 明显慢于 CaSk i细胞 。流式细胞仪检测细胞周期显示 , CaSk iS细胞与未转染组 CaSk i细胞 比较 , G 期细胞比例明显增加 , S期细胞比例则明显减少 。裸鼠体内成瘤性及生长活性显示 1 CaSk iS细胞显著低于 CaSk i细胞 。而 CaSk iP细胞无论是在 E7 mRNA 和蛋白的表达 ,还是 在肿瘤细胞生长 、细胞周期的改变及成瘤性方面都与 CaSk i细胞无明显差异 。结论 : HPV 16 E7 siRNA 表达载体能有效地抑制宫颈癌 CaSk i细胞 E7基因的表达 ,部分逆转其恶性表型。 因此它有望成为宫颈癌基因治疗的新策略之一 。 　　【关键词 】　人乳头状瘤病毒 16 E7; siRNA 表达载体 ;宫颈肿瘤 ;基因疗法 　　中图分类号 : R737. 33　文献标识码 : A 　文章编号 : 1004 - 7379 (2007) 03 - 0 186 - 05 The effect of HPV16 E7 spec if ic siRNA expression vector on perlifera tion and tumor igen ic ity of cerv ica l cancer CaSki cells. Wang D anqing, Peng Zh ilan, Yin R u tie, et a l. D epartm en t of Obstetrics and Gy necology, West Ch ina S econd Hosp ita l, S ichuan Un iversity, Chengdu　610041 　　【A b stract 】　O bjective: To in terfere the HPV 16 E7 in CaSk i cells by vectorba sed RNA in terference techn ique and inve stigate the effect of HPV 16 E7 sp ecific exp re ssion vector on p er liferation and tumorigen icity of cervical cancer CaSk i cells, and exp lore the fea sib ility of siRNA exp re ssion vector in treatm en t of cervical carcinom a. M ethods: The HPV 16 E7 siRNA exp re s