HSP27高表达和低表达乳腺癌细胞的比较蛋白质组学研究.pdfVIP

浙江理工大学学报，第26卷，第 5期，2009年 9月 JournalofZhejiangSci—TechUniversity Vo1．26，No．5，Sept．2009 文章编号：1673—3851(2009)05—0770—06 HSp27高表达和低表达乳腺癌细胞的比较蛋白质组学研究 陈 栋 ，蒋字翔 ，王 玮 ，李贵发 ，谷明波 ，丁 明 ，崔玉昆 ，赵辅昆1．。 (1．浙江理工大学生命科学学院，杭州310018；2．贝勒医学院乳腺中心，休斯敦TX77030； 3．中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所，上海 200031) 摘 要：以Hsp27高表达的乳腺癌细胞株MCF-7为亲本，分别通过导入靶 向Hsp27的 shRNA敲减载体和对 照空载体的方法，构建了Hsp27敲减细胞株和相应对照细胞株。然后对对照细胞株与Hsp27敲减细胞株3B2进行 了比较蛋白质组学研究，结果发现在双向凝胶电泳的差异蛋白质表达谱上 ，共有 7个明显差异蛋白点，经过 MALDF TOF-TOF质谱分析和数据库搜索，共鉴定 出了4个差异蛋白点，它们分别是 Hsp27和另外 2种差异表达的蛋 白 OVCA2和PYRG2。本实验构建了Hsp27敲减的稳定细胞模型并为进一步了解 Hsp27的生物学功能提供 了新的 线索。 关键词 ：乳腺癌；热休克蛋 白27；RNA干扰 ；双向凝胶 电泳 ；质谱 中图分类号：Q279 文献标识码：A O 引 言 乳腺癌是女性最常见的一种恶性肿瘤，和大多数癌症一样，乳腺癌具有异质性的特点。而临床医生只能 通过临床病理参数部分理解，这就阻碍了对乳腺癌的临床各个阶段的准确诊断和合理治疗_l1]。有些研究发 现 Hsp27在一些肿瘤中高表达，如乳腺癌、前列腺癌、子宫癌、胃癌、膀胱癌_2]。在一些乳腺癌患者 中， Hsp27的过表达与乳腺癌患者术后短时间内远端转移的复发有关，提示 Hsp27的表达能够明显地增加乳腺 癌细胞的侵袭和转移能力[3]，更重要的是乳腺癌中Hsp27蛋 白高表达能对一些化疗药物(如阿霉素)产生 抗性_6]。Hsp27在一些胁迫条件作用下发生磷酸化形成寡聚体，从而产生活性来调节某些蛋 白的降解_7]。 有文献报道 Hsp27可以通过抑制Caspase蛋 白的激活和活性来抑制细胞的凋亡_l8]。还有研究表明在极高 热[9]，细胞松弛素D处理_10]等外界胁迫条件下，Hsp27的过表达能增加 F_肌动蛋 白微丝的稳定性，从而阻 止细胞骨架的破坏，有利于细胞的存活。总之，Hsp27是一个涉及到细胞生长，细胞骨架的稳定，耐药性的 产生，细胞凋亡以及癌细胞的转移等重要蛋 白。有研究表明Hsp27可以通过调节某些mRNA稳定性来调 节基因的表达口 ，但用蛋 白质组学的方法对 Hsp27影响其它蛋 白表达的研究尚未见报道。本研究报道 了 Hsp27敲减的稳定乳腺癌细胞株的建立并采用比较蛋 白质组学的方法研究在乳腺癌细胞中Hsp27表达量 变化对其它蛋 白质表达的影响，发现了两个具有重要功能的受 Hsp27调节的蛋 白质，为更加深入地了解 Hsp27在乳腺癌细胞中的生物学功能提供了细胞模型和研究参考。 1 材料和方法 1．1 主要材料和试剂 大肠杆菌(E．coli)TG1，MCF-7乳腺癌细胞株为本实验室保存；质粒 RNAi—ReadypSIREN—RetroQ(以 收稿 日期 ：2009—01—16 作者简介：陈 栋 (1984一 )，男，浙江绍兴人，硕士研究生，主要从事癌症蛋白质组学的研究。 第5期 陈 栋等：Hsp27高表达和低表达乳腺癌细胞的比较蛋白质组学研究 771 下简称 pRetroO)购 自Clontech公司；限制性内切酶，T4DNA连接酶购 自Takara公司；Fugene6转染试剂 购 自Roche公司；嘌呤霉素(Puromycin)购 自Invivogen公司；MEM 培养基，FBS购 自Gbico公司；ECL检 测试剂盒，辣根过氧化物酶标记的羊抗小鼠IgG购 自KPL公司；辣根过氧化物酶标记的羊抗兔 IgG购 自 CellSignaling公司；小鼠抗人 t]-actin抗体，兔抗人 Hsp27抗体购 自Abcam公司；2-DE所用试剂均购 自GE Healthcare公司。 1．2 方法 1．2．1 敲减载体和对照空载体的构建 根据 H