hTFF3基因真核表达载体构建及表达鉴定_郑倩倩.pdfVIP

中国医科大学学报 第40 卷 第10 期 2011 年10 月 877 Journal of China Medical University Vol.40 No.10 Oct. 2011 · · hTFF3 基因真核表达载体构建及表达鉴定 郑倩倩，郭文东，朱亚勤 （中国医科大学基础医学院细胞生物学教研室，教育部医学细胞生物学重点实验室，沈阳110001） 摘要 目的 克隆人肠三叶因子基因hTFF3，构建重组真核表达载体pEGFP-C1-TFF3 ，并在真核细胞中表达。方法 应用逆转 录聚合酶链式反应（RT-PCR）技术，从真核细胞中扩增得到人TFF3 的全长序列，克隆至表达增强型绿色荧光蛋白载体中，经酶 切、PCR 鉴定后测序证实克隆成功。将重组载体转至真核细胞，荧光显微镜观察下转染效率，同时采用RT-PCR、Western blot 技 术检测外源基因TFF3 的表达。结果 成功将hTFF3 基因克隆到真核表达载体中，酶切片段与预期大小一致（200 bp）。在荧光 显微镜下观察转染后的细胞可见明显的绿色荧光，RT-PCR 及Western blot 结果表明：转染后的细胞中TFF3 在转录和翻译水平 的表达均有明显提高。结论 成功构建了真核表达载体pEGFP-C1-TFF3 ，并在真核细胞中显著表达，为进一步研究TFF3 因子 的生物学功能奠定了基础。 关键词 肠三叶因子；克隆；表达载体 中图分类号 Q291 文献标志码 A 文章编号 0258-4646 （2011）10-0877-04 doi CNKI:21-1227/R1725.024 网络出版地址 /kcms/detail/21.1227.R1725.024.html Construction of EGFP-hTFF3 Vector and Identification of Its Eukaryotic Expression ZHENG Qian-qian ，GUO Wen-dong ，ZHU Ya-Qin （Key Laboratory of Medical Cell Biology of Ministry of Education，Department of Cell Biology，College of Basic Medical Sciences，China Medical University， Shenyang 110001，China） Abstract Objective To construct the eukaryotic expression vector pEGFP-C1-TFF3. Methods The full-length TFF3 gene sequence was amplified from Cos7 cells by reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR）. The fragment was inserted into Green Fluores－ cent protein （GFP）expression vector digested by Bgl Ⅱand EcoR Ⅰenzymes ，the same with PCR product digestion. The recombinant was transfected into Cos7 cells and the exogenous expression of TFF3 gene was detected by RT-PCR and Western blot. Results The pEGFP- C1-TFF3 eukaryotic expression vector was successfully constructed and the inserted sequence was 200 bp in accordance with our expectation. The vivid green fluorescence was observed in transfec