PCR相关技术在口腔微生物鉴定中的应用.pdfVIP

维普资讯 · 122 · 旦膣匡堂 志2qH0生2月第20卷第2期 JClinStomatol，Feb，2004．vo1 ． 20．No．2 PCR相关技术在 口腔微生物鉴定 中的应用 闫培芳 综述 梁景平 审校 (上海第二医科大学附属第九人 民医院 口腔 内科 上海 200011) [摘要] 细菌感染是121腔疾病最常见的病因，准确、简便 、快速鉴定病原菌无论对临床诊治还是对实验研究都 有重要意义。多聚酶链反应 (PCR)的理论和技术为细菌分型提供 了可靠的保证。本文就 PCR相关技术及其在实 践中的应用作一评述。 [关键词] 聚合酶链反应；121腔微生物 ；菌种鉴定 [中图分类号] R780，2 [文献标识码] A [文章编号] 1003—1634(2004)02—0122—03 传统的细菌鉴定技术 已不能满足 口腔感染性疾病 的诊断 AP—PCR技术可用于 口腔细菌种间、亚种间乃至株间的亲 和流行病学调查的需要 。从型、亚型 、株 、甚至分子水平上去认 缘关系分析 ，未知菌株的快速鉴定和流行病学调查等。Craig[J 识121腔病原菌变得愈来愈重要。PCR技术 的发展 。开辟 了细菌 等用两个 10b的寡核苷酸引物3和 13对牙周炎患者龈下菌斑 分类鉴定 的新途径。它具有快速、简便 、分辨率高 的特点 ，并可 中的微小消化链球菌核苷酸进行 AP—PCR分析。结果显示该 进行多相分类鉴定。按种系进化关系精确定位和定种 ，使细菌 菌在牙周病 患者 中呈异源性。Waltimo[5J等应用两种不 同引物 分类鉴定方法更客观合理 。本文对以PCR为基础的几种分类 RSD6和 RSD12对 37例感染根管样本 中的白色念珠菌运用 AP 鉴定方法在 口腔微生物检测方面的应用作一综述 。 — PCR技术进行检测 ，结果检测出31种不同的基因型。 1．多重PCR技术 (MultiplexPCR) 多重PCR是设计多对 AP—PCR显著 的优点是在对基 因组序列一无所知的前提 引物在同一个 PCR反应体系中进行扩增。同时产生几个不同的 下即可分析其 DNA的多态性 ，而随机引物可以是任意 10bp的 特异性区域片段。该技术在检测 口腔病原菌方面 已有较 多应 单链寡聚核苷酸片段。但 Olive[J等认为 由于引物不能与一些 用。Wahlfors[等根据细菌 16SrRNA序列 的可变区设计 出特 特殊的基因位点结合，使得引物与模板位点间发生不完全性杂 异的引物用于检测牙周病 患者龈下菌斑 中的放线共生放线杆 交 ，加之扩增过程敏感性极高 ，在退火温度下 的轻微变化都能 菌(Aa)和牙龈卟啉单胞菌 (Pg)。Sim。nJ等在此基础上又进行 导致 图谱条带的改变 ，而且根据经验来设计 引物 ，给其最佳反 了改进，使用每一菌种的一种特异性正 向引物结合单一保守性 应条件和试剂浓度的选择带来了困难 ，这些导致 了AP—PCR 的反向引物进行多重 PCR反应，从而使得检测更为敏感 ，同时 实验重复性差 ，难以实现标准化，不利于实验室间的比较。 检出了Aa，Pg和福赛斯拟杆菌 (Bf)3种细菌。＆ aJ等利用 3．PCR一限制性片段长度多态性分析 (Restrictionfragment 生切种 16S核糖 体 RNA分 子结 构特 点设计 引物 ，根 据 lengthpolymorphism analysis，RFLP) PCR—RFLP分析是第 16SrRNA保守区设计通用引物 (E)，又相对应于 Aa、Pg和 Bf的 一 代以DNA指纹 图谱为基础用于细菌分型鉴定的方法。不同