Red重组系统在基因敲除中的应用.pdfVIP

遗 传 HEREDITAS(Beijing)25(5)：628～632，2003 专 论 与 综 述 Red重组系统及在微生物基 因敲 除中的应用 胡 望 ，史兆兴 ，赛道建 ，黄 留玉 (1．军事 医学科学 院生物工程研 究所 ，北京 100071；2．山东师范大学生命科学学 院，济南 250014) 摘 要 ：在完成 了对各种微生物基 因组 的测序 以后 ，功能基 因学 的研 究变得尤为重要 。研 究基 因功能最直接 的方 法便是将待研究的基 因失活 。最初构建基 因突变体是采用大肠杆菌的RecA系统 ，但是 RecA重组系统操作复杂 ， 重组效率低 。最近建立 了 Red重组系统 ，该 系统 由 3个 蛋 白组成 ：n蛋 白(即 核酸外切酶)，B蛋 白，Gam 蛋 白。应 用 Red系统进行基 因敲除 ，可 以直接利用线性打靶 DNA，两侧 同源臂长度在 35～6Obp即可发生 同源重组 ，且重组 效率 高 。 关键词 ：Red重组系统 ；基 因敲 除；抗药性基 因 中图分类号 ：Q933 文献标识码 ：A 文章编号 ：0253—9772(2003)05—0628—05 TheRed Recombination System and ItsApplication toGeneKnock—outinM icroorganism HU Kun～，SHIZhao-Xing ，SAIDao—Jian ，HUANG Liu—Yu (1．BeijingInstitute ，Biotechnology，Beijing 100071，China； 2．CollegeofLifeScienceofShandongNormalUniversity，Jinan250014，China) Abstract：SincemanyDNA-sequencingprojectsofvariedmicroorganismshavebeencompleted，studiesontheirfunc— tionalgenom icsbecom emoreimportant．Inactivationofaninterestinggeneisadirectm ethodtocharacterizeitsfunc— tion．ThoughtheEsherichiacoliRecA recombination system canbeusedto producegenemutants，itneedsacom— plexmanipulationprocess．Furthermore，itsefficiency isvery low．Recently aRed recombination system wasdevel oped．Thisrecombination system consistsofthreeproteins：nprotein( exonuclease)，Bprotein andGam protein．In thissystem ，thelineartargetingDNA whichcontainsaselectablemarkerflankedwithahomologousregionasshort asonly35～ 6O bp canbedirectlytargeted forgeneknockoutwithahigherefficiency． Keywords：Red recombination system ；geneknockout；resistantgene 自l995年第一个细 菌 即流感 嗜 血杆菌 (Haemophilus 统是大肠杆菌 内源性 的同源重组机构 ，它 由 RecA 和 RecB fluenzae)的全基 因组序列被发表 以来 ，已经完 成 了包 括 大 CD组成 。RecA蛋