Tcf复合体cyclinD1cmyc在鼻咽癌中的表达及临床意义.pdfVIP

浙江实用医学2010年6月第 15卷第 3期 ZhejiangPracticalMcxticineJune．2010，Vo1．15，No．3 ·169 · · 临床研究 · 』3一catenin／Tcf复合体、cyclinD1、c—myc在 鼻咽癌中的表达及临床意义 林琼琼 李锦添 (1．温州医学院附属第二医院，浙江 温州 325027；2．中山大学肿瘤防治中心，广东 广州 510060) 【摘 要】 目的 探讨 Wnt／3[一catenin通路中I3一cateifin／Tcf复合体和下游主要靶基因cyclinD1、c—mvc在不同分化程度 鼻咽癌中的表达，进而阐明Wnt／~一catenin通路在鼻咽癌分化中的作用。方法 转染野生型和突变型 f荧光素酶报告质 粒，检测 口一catenin／Tcf复合体在高低分化鼻咽癌细胞株中的含量；采用免疫组化方法检测79例不同分化类型的鼻咽癌组织 中cyclinD1、c～myc的表达。结果 通过检测转染后荧光素酶活性发现 口一catenin／Tcf复合体在低分化鼻咽癌细胞株 (CNE～2 和HONE一1)中的表达是高分化鼻咽癌细胞株 (CNE一1)的80．12～123．6倍。在角化性鳞癌与分化型非角化癌 、分化型非角 化癌与未分化型非角化癌中，cyclinD1表达有统计学差异 (均 P0．05)。c—myc的表达在未分化型非角化癌和分化型非角化 癌之间比较，同样有统计学差异(P0．01)。结论 低分化鼻咽癌细胞比高分化鼻咽癌细胞有更高水平的核内B～catenin／Tcf 复合体、cyclinD1和c—myc的表达，说明前者的Wnt／31一catenin通路比后者明显地处于更高的活化状态中，提示 Wnt／13一 catenin通路可能在抑制鼻咽癌细胞的分化中起重要作用。 【关键词】 8一catenin／Tcf cyclinD1c—myc 鼻咽癌 Wnt／3[一catenin通路是胚胎组织发育分化所必 荧光素酶检测系统和 8一半乳糖苷酶检测系统均产 需的关键信号通路…1，其多种重要成分 已经证明在 自Promega公司。eyclinD1多克隆抗体为Newmarker 细胞分化中有明确的作用。该通路主要通过枢纽 公司产品，c—myc单克隆抗体(克隆号 9El0)购 自 分子 G—eatenin从胞浆 内进入核 内与 T细胞 因子／ SantaCruz公司，、免疫组化 S—P二步法试剂盒和 淋 巴增强样因子 (f／f)结合成 8一catenin／Tcf复 DAB显色剂均购 自北京中山生物技术有限公司。 合体起作用，启动下游靶基因cyclinD1、c—myc、COX一 1．3 方法 2等的转录，调控细胞发育分化并参与肿瘤 的发生 1．3．1 细胞传代 以2．5×lO4细胞数在 24孔板 发展。本研究对不同分化程度鼻咽癌细胞株中8一 中生长至75％～95％面积时用脂质体 2000进行转 catenin／Tcf复合体的表达水平进行检测，并进一步 染。每 种 细胞 分 别 转 染 TOPFLASH／3[一gal和 研究该通路下游基因cyclinD1和 e—myc的表达 ，对 FOPFLASH／~一gaJJ各 0．8 g，且每种细胞转染 3个 上述三个分子和鼻咽癌分化的关系进行研究，为将 平行孔 ，并做 阴性对照。按照 Promega公司的说明 来通过该通路对鼻咽癌进行靶向治疗提供基础 。 书在 48小时后加入裂解缓冲液并收集细胞裂解 液。在 BIOSCAN公司的单光子仪 (LUMI--SCINT 1 材料与方法 rIⅥ)上检测 30秒 内荧光素酶催化荧光素氧化反应 1．1 材料 收集温州医学院附属第二医院2004 所产生的光强度 (RelativeLuciferaseUnit，RLU)；并在 年 1月 ～2008年 12月病理诊断为鼻咽癌的石蜡标 分光光度计上测定 p一半乳糖苷酶 (—ga1)在 本 79例，其中角化性鳞状细胞癌