一种新型对虾白斑综合症病毒和桃拉综合症病毒复合快速检测技术二温式多重PCR的建立.pdfVIP

农业生物技术学报 Journal ofAgriculturalBiotechnology 2007,15 (2): 237~241  ·研究论文 · 二温式多重 PCR 检测对虾 的白斑综合症病毒和桃拉综合征病毒 *  吴刘记  吴信忠  孟庆 国 ,  **, （浙江大学动物科学学院 ，杭州 310029） 摘要 ：根 据多重 PCR 的技术原理 ， 利用对虾 （ ） 白斑综合征病毒和桃拉综合征病毒 的基 因序列分别设计 了两对特异引物，并将常规三温式 PCR 扩增程序简化为 2个温度梯度 ，建立二温式多重 PCR技术用于对虾白斑综合征病毒 （ ,WSSV） 和桃拉综合征病毒(  ,TSV )的复合快速检测。 利用二温式 PCR 能特异地 扩增出 和 的基因片段 。 结果表明 二温式多重 技术具有较高的特异性和敏感性 ， 最低能检测到 核酸模 WSSV TSV , PCR WSSV 板 10pg,TSV 核酸模板 100pg， 且对其它一些对虾病原呈阴性。 ： 关键词 白斑综合征病毒； 桃拉综合征病毒； 二温式多重 PCR  1006­1304(2007)02­0237­05  中图分类号：  文献标识码：  文章编号 ：  S188  A  Two­temperature andMultiplePCR for the Simultaneous  Detection of  and  in  WULiu­ji ,WUXin­zhong**,MENGQing­guo  Basedon theprincipleofthe multiplePCR,two sets of specificprimerswere designed accordingtothe gene sequences  of  (WSSV ) and  (TSV )to detect WSSV andTSV simultaneously.In theprocessof  detection,anew modified two­temperature andmultiple PCR was developed from threetemperature and regular PCR.It showed that  all sampleswhich containedWSSV andTSV couldbe simultaneouslydetectedby thetwo­temperature andmultiple PCR,andno spe­  cific band was amplified from control group of vibrio pathogen separated from shrimp  . By this modified PCR  methool,the sensitivity for detection of WSSV and TSV were 10 a