一种获取新基因的有效方法_cDNA末端快速扩增.pdfVIP

( ) 　　Ch in e se Jou rna l o f V eter inary M ed icin e　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 中国兽医杂志 2005 年 第 4 1 卷 第 9 期 6 1 一种获取新基因的有效方法——cD NA 末端快速扩增 1, 2 1 韩春来 , 汪　明 ( 1. 中国农业大学动物医学院, 北京 海淀 100094; 2. 北京市兽医卫生监督检验所, 北京 海淀 100044) 中图分类号: Q 781　　文献标识码: E　　文章编号:(2005) 09006 102 　 　 cDN A 末 端 快 速 扩 增 ( rap id am p licat ion o f cDN A 就需要从已知序列分别向 3 ′和 5 ′端延伸。 目 cDN A en d s, RA CE ) 又 称 为 锚 定 PCR ( an cho red 前, 将 RA CE 技术和生物信息学相结合, 就可 以快 PCR ) , 由F rohm an 等于 1988 年发明, 是一种应用通 速、高效的克隆新基因。与其他筛选新基因的方法如 用引物和特异引物从低丰度转录本中快速扩增已知 消减 cDN A 文库、用同源探针进行 cDN A 文库筛选 表达序列标签(exp re ssed sequ en ce tag s, E ST s) 的 5 ′ 等相比, 具有假阳性率较低、 的需要量 RA CE RN A 和 3 ′末端的简单而有效的方法。大多数E ST s 分布于 小、敏感、快速等优点。 3 ′端, 并且一般只有 300～ 500 bp , 而大多数编码基 1　RACE 的原理 因的 则为 1. 5～ 2. 0 , 因此要得到全长 m RN A kb RA CE 是在反转录的同时, 在 5 ′和 3 ′端加上通用 接头引物, 然后利用通用引物和基因特异引物进行PCR 收稿 日期: 反应, 从而快速获得目的基因cDN A 的5 ′和3 ′端。 ( ) 作者简介: 韩春来 1976 , 女, 博士, 研究课题为禽类干扰素受体 3 ′ 是 以 和一个接头组成 的接 基因的克隆与表达 RA CE O ligo dT 通讯作者: 汪明, : @ . . ( ) E m a il vetdean cau edu cn 头引物 , 来反转录 , 得到加