人胚肺二倍体细胞株KMB17凋亡模型的建立.pdfVIP

维普资讯 动 物 学 研 究 1999，Jaa．20 (3)：235~238 CN53。‘1040／Q ISSN0254。‘5853 zoo~gicalResearch 人胚肺二倍体细胞株 KMB17凋亡模型的建立 APOPTOTIC MODELOFHUM AN EMBRYONIC DIPLOID LUNG Fm ROBLAST INDUCED BY SERUM DEPRIVATION { 幸 召酉交 关键词 二倍体细胞，1月 亡，无血清培 Keywolds HumanembryoniclungdiD10树 fibrobhst Apopteds，Smtma-{reecalledttae 中围分粪号 R392·12 艮；2，f●2cJ 细胞凋亡作为生命的基本现象之一受到科学界的广泛 基础。 重视 (Linda等 ，1998)，对其机理和应用的研究 已渗透到 t 材料与方法 生命科学的各个领域，成为当今生命科学领域的研究热点。 特别是 以动物细胞为培养基质的医药生物技术领域尤显重 1．1 人胚膊二倍体蠲胞株 IOdlB17 由医学生物学研究所 要：因为动物细胞培养技术是现代生物技术研究和开发的 提供。 关键技术之一。大规模动物细胞培养为疫苗、干扰素、激 1．2 甲量肝炎瘸毒曩毒株 (H2) 由医学生物学研究所 素、生长因子、酵和单克隆抗体等制品的生产提供了有效 提供。 的技术手段，利用动物细胞技术生产的生物制品已占世界 1．3 无血清诱导蠲臆凋亡 将代次为20～30代、正常生长 生物高技术产品市场份额的50％ (Cooaey，1995)：动物细 的人二倍体细胞(1口皿 l7)用胰蛋白酶消化后分种于塑料培养瓶 胞培养过程中的细胞捅亡是影响生物技术产品产量和质量 中(225co~ang)．细胞生长营养藏为：新生牛血清10％、MEM水 的重要因素。一方面细胞凋亡使产品的产量下降；另一方 解乳蛋白混合液85％、答氨酰胺 2％、卡拉霉紊。”℃培养3d， 面凋亡细胞释放的蛋白酶可降解细胞 的目的产物；再一方 细胞长成汇流状单层后．倾弃生长营养液，加入不舍血清的生长 面凋亡过程中产生的 自由基修饰 目的蛋白因子 ，使之失去 营养藏后，置37C培养．同时每隔30mn／显截镜下观寨．出现细 正确 的空 间构象 ，严重影 响产 品的质量 (AIflat，19981 胞圈缩时，将正常梭形形态细胞及变成圈形的细胞用胰蛋 白酶 Timan等．1997)。因此 ，通过抑制细胞捅亡优化细胞培养 消化后加入0．1moi／I．礴酸盐疆冲涪藏(PBs)．离心弃上清、加入 70％的睁乙醇固定细胞 ，保存于一加℃备用(周剜峰等，1997)。 工艺，特别是发酵罐培养工艺 ．已成为提高生物技术产品 产量和质量的重要技术手段 (Mast~mgdo，1998)。人胚肺 1．4 藏式蠲_皇慢植测捐亡蠲臆 将乙醇固定的细胞离心后 二倍体细胞株KMB17是我国自己建立、井经卫生部批 准 加人磷酸盐缓冲溶液 (PBS)冼 2次。用古 PT。晡dj埘 iodide 正式用于生物制 品生产的两株人二倍体细胞之一 (Guo， (PI)荧光染料(50ttg／mL)及 0．1％TrltctaX一100的1mL 1981)。自1992年眦来，已成功地实现使用该细胞株大规 柠檬酸盐缓冲液悬浮沉淀细胞．置4℃保存过夜。将PI染 模产业化生产我国 自行研制的甲型肝炎减毒活疫苗 (} 色的细胞置激发光为480r吼 渡长的EPICSXL流式细胞仪 (Coulter，H eah，F1a．USA)检测。每个样品检测 104细胞， 株)，井建立 了产业化的细胞培养工艺 (Ma。等，1997)，