从新生小牛血清分离提取胎球蛋白.pdfVIP

重庆医科大学学报 1992年第l7卷第4期 从新生小牛血清分离提取胎球蛋 白 生物化学教研室 三 堕l 圭堕堡 何踢料 f弓．z j 提 要 本文用_已醇金属离子分级分离法．从新生小牛血清中分离提取抬球蛋 白。将分 离 提 取的胎球蛋 白．聚丙烯酰胺凝胶 电泳．在 一球蛋白位置．显示一条宽．着色辣的区带 ．而另有 一 条移动率慢、窄的、着色极淡的带；SephadexG-200凝脉过滤测得其分子量为 117．489。去 湿冻 干的胎球蛋 白柑 ．测得其秀液酸含量为8．85g／100g蛋白质；中性糖含量为 8．07g／lOOg蛋白质。以 新生小牛血清为原料．分离提取胎球蛋 白之产品率Jj3OOmg／lOOml血清 、／ 美羹词 瞌韭置自； 煎熊置自 牛：!皇些 中圈分羹号 Q531．2 骆球蛋 白 (Fetuin)是牛胎儿血 中 的 加入 1OM醋酸钣和95嘶_已醇．使混台后的溶液台 一 0 62MBa，和25嘧乙醇．调节pH6．7．放置2h．于 种糖蛋 白，Spiro(1960)” 从屠宰怀孕 的 ． 母牛获取牛胎儿血中，分离纯化胎球蛋白， 上赶条件离心．彝击沉淀。再于一10℃加／kos和乙 醇于上清液中．使混合后台乙醇40嘶．放置1~-．-16 并研究了理化性质。由于我国的饮食习惯， 小时．于上述条件离心，彝去上簿液，保留沉淀， 很少宰杀怀孕母牛，因而获取胎牛血较难 。 即为纯忧之骀球蛋 白。用少量0．02M柠檬酸三钠溶 本文试从新生小牛血清 中分离提 取 胎 球 蛋 解沉淀 ．再用蒸馏水透析数天．以除去B8抖和Zn¨。 白，以供研究或临床诊断之用 。 最看冷冻干燥制成冻千蛋白粉。 5． 囊丙嚆t聩麓腔电诛 垂直平板 电诛。凝 材 料 和 方 法 胶板100X110X1．5ottal。浓缩胶．PH6．7 凝 胶 浓度2．5％ 分离胶．pH$．9．凝胶浓度7％．电极 1． 新生小牛血j膏 剐出生的小牛，从心脏抽 缓冲掖为pH8_3_Trjs_甘氨酸缓冲液。直流电潦， 血 ．立即分离血清．一20℃贮存 电压 140~230v．电流 7—10mA．功率稳定于1．5 2． 胎球叠 自的分膏摄取 用乙醇一金属 离子 W。 电泳时间5h。考马斯亮兰R250染色。 分级分离法 “。小牛血请 于 一5℃加八 2倍体 积 4． 蛋白培台中性麓毳定 按Shields法 涮 2g．5嘶乙醇 (含0．03M醋酸锌，．调节pHi64． 定 以蒸馏水溶解乙醇沉淀之蛋白质，加入 0．2嘶 放置12—1Bh后．于0—4℃，4．500rpm离心20miⅡ． 蒽酮．92℃保温 gm ．波长585nm~；色 标准糖 弃击沉淀．保留上清渍。叉子 一5℃。向上清 艘I和 溶液为半乳糖 甘露蓿 (1：lJ混台液 变异系数 erte~slvegroup than thecoatrolgroup(P0．02