切片标本的制作.docVIP

切片标本的制作 本次实验采用的是石蜡切片法。 石蜡切片法的程序如下： 取材→固定→冲洗（洗涤）→脱水→透明→包埋→切片→贴片→烘片→脱蜡→复水→染色→脱水透明→封藏。 上述每个程序的要求和方法可归纳为透蜡制片和染色两大步骤，现简单介绍如下： 脱水步骤为： 将组织块浸入系列酒精70%→80%→95%→100%→100%各30min。脱水的实际时间长短视组织块的大小而定，但不宜过长。 透明步骤为： 将组织块浸入二甲苯与无水乙醇（1：1）的混合液30min→二甲苯30min→二甲苯30min。 透蜡步骤为： 将组织块浸入二甲苯与石蜡（1：1）的混合液30min→石蜡30min→石蜡30min。 脱蜡程序为： 纯二甲苯（脱蜡）15min→纯二甲苯15min→二甲苯：纯乙醇（1：1）3min 复水程序为： 纯乙醇3min→95%乙醇3min→90%乙醇3min→80%乙醇3min→70%乙醇3min→60%乙醇3min→50%乙醇3min→30%乙醇3min→蒸馏水 H、E染色程序为： 将已复水的切片放入苏木精染液中（30分钟以上），水洗2分钟，在0．5%的盐酸水中分色3秒（当在显微镜下检查时，核褪至淡红色，细胞质及结缔组织几近无色即可）蒸馏水洗1分钟，0．1%氨水中蓝化（1~3分钟，核呈蓝紫色），蒸馏水洗（1分钟），切片由低至高浓度的系列酒精中脱水（每级3~5分钟）至95%乙醇→切片入0．5%伊红中复染（3分钟）（伊红由95%乙醇配制的）→95%乙醇中分色（显微镜检查呈蓝紫色，胞质及结缔组织为粉红色）→95%乙醇轻洗（除去玻片上多余的伊红染液。动作要迅速，否则组织上的伊红要脱下来）。 透明程序为： 将已脱水的切片依次放入纯乙醇：二甲苯（1：1）→二甲苯⑴→二甲苯⑵中，每级15分钟。 2．1透蜡制片 1．2．1．1、取材 从实验罗非鱼最后一根背鳍下方用解剖刀取下3×3×4mm左右的新鲜肌肉块 取材时要注意组织块方向与肌纤维走向要一致。同时，取材时动作迅速，保持组织的新鲜，取材所用的解剖刀要锋利。 1．2．1．2、固定 把取下的肌肉组织块迅速投入已预先配制好的Bouin,s固定剂中固定。固定剂中的药品可以使构成组织的蛋白质变性凝结，组织块硬化，从而保持组织及细胞的原来形态结构。 Bouin,s固定剂配方如下： 苦味酸饱和溶液 75ml 福尔马林 25 ml 冰醋酸 5 ml 1．2．1．3、冲洗（洗涤） 肌肉块经固定剂的处理，会在肌肉的表面或内部残留着组织液，这些残留的药品若不除去，将会对以后的制片过程产生不良影响，所以肌肉从固定剂中取出后，必须经流水冲洗或数次的乙醇洗涤，使得组织中残留的固定剂全部除去为止。 1．2．1．4 4