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可还原降解超支化改性PEI基因载体的研究.pdf
PEI
0
[1] (PEI)
[2] 1.8 kDa
PEI [3]
Lee 0.8 kDa PEI PEI
[4] PEI DNA
PEI DNA [5] PEI
1.8 kDa PEI[6] 2.6, 3.1, 4.6 kDa PEI [7] PEI
PEI PEI
[8] DNA
PEI PEI
PEI
1
1.1
1.8 kDa (PEI)Alfa Aesar 25-kDa 800 Da PEI Sigma-Aldrich 1,1-(CDI
)3-
(3-(4,5-Dimethyl-2-thiazolyl)-2,5-diphenyltetrazoliumBromide, MTT)Sigma-Aldrich pcDNA3-Luc DNA
PlasmidFactorypEGFP DNA [9]
1.2 PEI RDPEI
[10] 1.8 kDa PEI 800 Da PEI
PEI PEI1800-(N3)10 PEI PEI800-
(alkyne) 1
PEI1800-(N3)10 0.32 , PEI800-(alkyne) 1 1.13 DMF
(DMF 4 120 ml), CuBr 20 mg 50oC 24 (MWCO 3.5
kDa)PEI PEI RDPEI
Mercury Vx-300Perkin Elmer GPC
1.3 RDPEI/DNA
N/P 90μL RDPEI 150 mM pH 7.410 μL pcDNA3-Luc DNA 0.1
mg/mL in 40 mM Tris-HCl buffer,15 37 30 1mL DLS
zeta Nano-ZS ZEN3600 Malvern InstrumentsN/P RDPEI/DNA GelRed 0.7%
80 V 60 min (Vilber Lourmat) 10 mM DTT
RDPEI/DNA
1.4
(293T) (HeLa)10% (FBS) 2 mg/mLNaHCO3 1% 10,000 U/mL (?)
DMEM (Gibco) 37 5% CO2
1.5
293T MTT RDPEI 25-kDaPEI 96 6000 /
293T 37 5% CO2 24 100 μL 0.01mg/ml 0.20mg/mL RDPEI25-kDa
PEI 10%FBS DMEM 37 5% CO2 24200 μL
DMEM 20 μL MTT 5 mg/mL in PBS buffer4 MTT
100μL DMSO 5 550 BIO-RAD 570nm
(ODsample-ODblank)/(ODcontrol-ODblank)×100% mean±SD, n=4
1.6
1.6.1 pcDNA3-Luc DNA
24 70 000 / HeLa 24 900 μL 10% FBS
RDPEI 25-kDa PEIpcDNA3-Luc DNA 4 1 mL 37 5%
CO2 48 (Lumat LB9507, Berthold)BCA protein assay reagent kit
(Pierce) RLU/mg protein mean±SD, n=3
1.6.2 pEGFP DNA
pEGFP pcDNA3-Luc 48h (IX 70, OLYMPUS, JAPAN)
2
2.1 PEI-SS-HP
PEI-SS-HP [10] PEI
PEI1800-(N3)10 1PEI800-(PPA-cyst)1 (2)PEI800-(PPA-cyst)1 2120 cm-1
800 Da PEI 0.96
1AP-CI 1.8 kDa PEI1800-(N3)10
2099 cm-1 AP-CI 1.8 kDa PEI
11 10PEI1800-(N3)10 PEI800-
(PPA-cyst)1 PEI RDPEI7.8 ppm
H2099 cm-1 2120 cm-1
GPC 11.7 kDaGPC
PEI RDPEI
2.2 RDPEI/DNA
DNA PEI RDPEI
N/P 10 40 DNA 200-300 nm 25-kDa PEI DNA
1.8-kDa PEI N/P 50 DN
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