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TLC生物自显影技术在药物筛选中的应用.pdf
.132. 中草药 ChineseTraditionalandHerbalDrugs第36卷第1期2005年1月
TLC生物自显影技术在药物筛选中的应用
曲建博,姿红祥’,范培红
(山东大学药学院,山东济南 250012)
摘 要:TLC生物自显影是一种将薄层色谱分离和生物活性测定相结合的药物筛选方法,具有操作简单、耗费低、
灵敏度和专属性高等优点,是一种快速测定生物活性的方法。可用于对具有抗菌/真菌,抑制胆碱酷酶以及清除自
由基和抗氧化等活性的天然产物的筛选,可实现活性指导的提取分离。利用TLC生物自显影,可测定单体活性化
合物的最小抑制浓度(MID),通过与对照品的MID值比较,能够推测该化合物活性的强弱。此外,利用TLC生物自
显影定性及定量的特征,还可对食物、水样及动物组织中抗生素残留量进行监测。现综述TLC生物 自显影技术及
其在天然产物筛选中的应用,同时对其优点及不足也进行了总结。
关键词:TLC生物自显影;抗细菌;抗真菌;胆碱醋酶抑制活性;自由基;抗氧化作用
中图分类号:R285-51 文献标识码:A 文章编号:0253一2670(2005)01一0132一06
ApplicationofTLC-bioautographytodrugscreening
QUJian-bo,LOUHong-xiang,FANPei-bong
(SchoolofParmacy,ShandongUniversity;7inan250012,China)
Keywords:TLC-bioautography;antibacterialactivity;antifungalactivity;cholinesteraseinhibition;
freeradical;antioxidation
从天然产物中得到的成分往往要进行生物活性测定。传 盖而呈现背景色,活性部位因抑制了病原微生物的生长而呈
统的活性测定方法需在整个动物或某个器官上进行,这要求 现抑制斑点,这样就可从混合物中筛选出活性成分E[ll,TLC
被测化合物首先被分离出来,并且要有足够大的量,许多从 生物自显影通常有3种方法:琼脂扩散法(agardiffusion),
天然产物中得到的成分不能满足这一要求[[I]。目前常用的微 直接TLC生物自显影检测法(directTLCbioautographyde-
量生物活性测定方法,如微生物抑制法 ((STOP,LAST, tection)和琼脂覆盖法(agaroverlay),
CAST,FAST,BR-Test,DelvotestP),酶法(Penzyme)、免疫 1.1.1琼脂扩散法:较早被使用的一种方法,以接种了病原
测定法[enzyme-likedimmunosorbentassay(ELISA),Cite 微生物的培养基为载体,将吸附了待测化合物的薄层板与培
Probe]和放射性免疫测定法(Charm),可对微量化合物进行 养基表面相接触,在0^-4℃的条件下培养过夜(HPTLC板
较准确的活性测定,但是这些方法在使用过程中有一定的局 所需时间短),利用化合物的扩散性质,将吸附在薄层板上的
限性。例如,微生物抑制法虽然操作简单、耗费低,但是其专 化合物转移到培养基表面,取走薄层板,培养基在37℃左右
属性和灵敏度不高,易出现假阳性结果;酶法和放射性免疫 的条件下培养过夜以进行生物自显影。一般情况下,在培养
测定法虽然灵敏度高,但其花费相当昂贵,一般不适用于未 基中加人一定量的四哩盐(如MTT,INT等),会使结果更
经分离的天然药物筛选[21。而TLC生物自显影法可弥补以 易观察[[3](因为MTT,INT等四哇盐本身颜色较浅,且易被
上不足,其操作简单、耗费低、灵敏度和专属性高,是一种快 细菌的代谢产物转化为颜色较深的甲婚类化合物,从而形成
速测定生物活性的方法仁卜〕‘,尤其适用于对具有抗菌/真菌, 背景色)。由于硅胶与琼脂之间的吸附作用
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