外周血内皮祖细胞分化成内皮细胞的实验研究.pdfVIP

·18 · 心 脏 杂 志 (Ch in H eart J ) 2006, 18 ( 1) 脐血 、外周血内皮祖细胞分化成内皮细胞的实验研究 1 1 2 1 2 2 2 邵 　琴 ,王长谦 ,范华骅 ,姜 　萌 ,刘 　嬿 ,聂晓绚 ,高 　跞 ( 1. 上海交通大学附属仁济医院心内科 ,上海 20000 1; 2. 上海血液中心血液工程研究室 ,上海 200051) ( ) 摘要 : 目的　探讨人的脐血 、外周血内皮祖细胞 endothelial p rogen itor cells, EPC s 体外分离 、纯化 、诱导扩增和分 化为内皮细胞的可行性 ,并检测其表型和功能 。方法 　新鲜脐血和健康成年人的外周血 ,使用 F icoll密度梯度离心 法得单个核细胞 ,在 M 199培养基中体外培养 , 3 d后去除悬浮细胞 ,继续培养 ,诱导 EPC s增殖和分化 。流式细胞 仪检测 EPC s标志 CD34和内皮细胞特异性标志 CD3 1表型 , R TPCR 检测 ecNO S, flk1/ KDR 基因水平表达 ,免疫组 化验证蛋白水平表达 ,并进一步通过 NO 活性的变化检测内皮细胞的功能 。结果 　流式细胞仪检测 ,外周血单个 ( ) ( ) 核细胞 p erip heral b lood mononuclear cells, PBMC 刚分离时 , CD34 阳性表达率为 1. 1 ±0. 8 % ,培养 3 d 后为 ( 16. 9 ±6. 2) % 。细胞形态观察发现 ,刚分离的单个核细胞呈圆形 ,形态小 , 3 d后有明显集落形成 , 7 d后梭形细胞 ( 线样排列 ,随培养时间增加 ,细胞形态逐渐变大 ,呈现出典型铺路石样改变 。脐血单个核细胞 um b ilical cord b lood ) ( ) ( ) mononuclear cells, CBMC 和 PBMC培养 10 d后 , CD3 1阳性表达率分别为 76 ±17 %和 82 ±9 % 。R TPCR 检测 有内皮细胞特异性成分 ecNO S, flk1/ KDR 的表达 。免疫组化染色 ,细胞膜和细胞浆中有弥漫性棕色出现 ,呈阳性 反应 ,证实了蛋白水平的表达 。培养 10 d 的贴壁细胞随着 V EGF浓度增加 , NO 生成增加 ,具有内皮细胞的功能 。 结论 　脐血 ,外周血 EPC s体外分离 ,纯化 ,诱导培养后的贴壁细胞表型检测 ,大部分细胞具有内皮系标志物 ,并具 有产生 NO 功能 。 关键词 : 单个核细胞 ,脐血 ;血单个核细胞 ,外周 ; 内皮祖细胞 ; 内皮细胞 中图分类号 : R329. 2; R543. 3　　　文献标识码 : A 　　　文