大蒜白腐病菌粗毒素的GC-MS分析.pdfVIP

江苏农业科学 2011年第 1期 张林青，程智慧．大蒜 白腐病菌粗毒素的GC—MS分析[J]．江苏农业科学，2011(I)：359—362 大蒜 白腐病菌粗毒素的GC—MS分析 张林青 ，程智慧 (1．淮阴工学院，江苏淮安 223001；2．西北农林科技大学园艺学院，陕西杨凌 712100) 摘要：以大蒜 白腐菌粗毒素为材料，采用GC—MS分析研究大蒜 白腐病菌毒素的化学物质组分。结果表明，粗毒 素主要含有有机酸类、醇类 、酯类、甾体类 、杂环类化合物，其中月桂酸和邻苯二甲酸是致病毒素的有效成分，月桂酸的 毒性强于邻苯二甲酸。 关键词：大蒜；白腐病菌；毒素；GC—MS 中图分类号：$436．33 文献标志码：A 文章编号 ：1002—1302(2011)01—0359—04 大蒜 白腐病是大蒜的毁灭性病害，主要危害大蒜的根、鳞 物、氨基酸衍生物、肽和类萜化合物等，但迄今为止关于大蒜 茎和叶，苗期会造成 田间缺株死苗，严重者导致绝收。前人对 自腐病菌产毒培养国内外末见报道。本试验采用人工液体培 田间发生的白腐病病原鉴定认为，白腐病的病原为半知菌亚 养 白腐病病菌，利用GC—MS分析病菌粗毒素中所含的化合 门小核菌属 白腐小核菌(SclerotiumcepivorumBerk．)。。病原 物 ，初步确定其毒素的主要化学物质组分，为毒素在抗病育种 菌产生的对寄主植物有毒性的代谢产物称为致病因子，主要 中的应用和进一步开发利用奠定基础。 包括酶、毒素和激素3大类。自20世纪40年代植物病理学 1 材料与方法 家发现维多利亚长蠕孢 (ttelminthosporiumvictoriae)毒素 以 来，已对不少病原真菌毒素的种类及特点、培养及提取方法、 1．1 粗毒素制备 化学组成 、致病机制、测定方法、人工合成及应用前景等作了 大蒜 白腐病病菌经纯化后，接种到PDA培养基上，18℃ 广泛而深入的研究和报道 。 下培养 3d，用打孔器从平板上取 10块直径为 5mm 的菌块 由于已知的真菌毒素都为有机物质 ，因此，有机化学及生 接种到250mL理查德和Fries液体培养基中，18．0℃下连续 物化学中一些常用的方法都可用于毒素的提取、分离及纯化， 振荡培养 6d，8层纱布过滤，取上清液于4000r／min离心 概括起来这些方法主要包括浸提、吸附、萃取、结晶、重结晶、 10min，上清液经0．45 m的滤膜过滤，得到病原菌粗毒素。 离心、超滤、分级沉淀及色谱等技术，其中色谱技术是应用最 1．2 GC—MS鉴定 多也是最有效的方法 。 将粗毒素用低温冷冻干燥机 (FreeZone6Liter77535， 毒素的鉴定是一个 比较复杂的问题，在弄清楚毒素基本 LabconcoCorporation，USA)冻干，溶于 1mL乙酸乙酯中，采用 的物理、化学及生物性质的基础上，常需要综合运用色谱 、光 GC—MS(GC为Agilent6890，MS为HP5973)鉴定其化学物质 谱、波谱、质谱等多种现代分析手段来测定其分子量和鉴定分 的成分。GC—MS分析条件如下：色谱条件：毛细管柱：HP一5 子结构。随着信息技术的发展，应用于有机化合物结构鉴定 (Crosslinked5％ pH ME Siloxanle。30 m ×0．25 mlll× 的技术不断革新，除了单独的波谱、质谱仪器不断改进外，目 0．25 m)；进 样 口温度 ：250 ℃；程 序升 温 ：柱 温 50 ℃ 前的发展方 向是分离和鉴定仪器的联合应用 ，能使分离分析 (2rain)，以6~C／min程序升温至 250℃ (保持 15min)；载 和结构鉴定一次完成。 目前广泛应用的联用仪器有液 一质联 气：He；流速：1．0mL／min。质谱条件：EI源 (电子轰击源)；