金属硫蛋白突变体的植物高效表达载体的构建及其在烟草中的表达.pdfVIP

第15卷第6期 中国生物化学与分子生物学报 V o l. 15,N o. 6 1999年12月 Ch inese Jou rnal of B iochem istry and M o lecu lar B io logy D ec. , 1999 金属硫蛋白突变体的植物高效表达载体的构建 及其在烟草中的表达 张晓钰　李　伟　张　竞　何笃修　茹炳根 (北京大学生命科学学院生物化学与分子生物学系, 蛋白质工程及植物基因工程国家重点实验室, 北京　100871) 摘要　金属硫蛋白有 、 两个结构域( ) , 其中 结构域优先结合 2+ 和 2+ 小鼠 突变 dom ain Cd H g 体在大肠杆菌中已经构建并得到表达, 其转基因植株已得到, 可在 300 (300 ) 中生长. 为了 Cd m o l L 进一步提高外源基因在烟草中的表达量, 首先用 PCR 的方法设计引物, 在基因翻译起始密码子 A T G 附近加入植物偏爱的碱基组合AA CAA T G 另外, 将该突变体基因插入具有双35 S ( 35 ) 强启动子的植物双元表达载体 35 中, 获得了带有 突变体的植物双 CaM V S pGPTV d S BA R 元表达载体. 通过农杆菌介导的叶盘转化法转化烟草N C 89, 获得了抗除草剂的转基因植株. 经 和蛋白 检测, 证明了 突变体在烟草中的嵌合与表达. 抗重金属实验 PCR Sou thern Do t b lo tting 证明转基因烟草可以在 400 (400 ) 中生长. Cd m o l L 关键词　金属硫蛋白突变体, 高效表达载体, 构建, 表达 Con struction of H igh Eff ic ien t Expression Vector of M eta lloth ione in M utan t in Plan t and its Expression in Tobacco , , , , ZHAN G X iaoyu L IW ei ZHAN G J ing H E D ux iu RU B inggen