百草枯人工抗原的合成及抗体的制备.pdfVIP

924 堕型!Q盟二塑!墨绁堕皇佥壬鱼瘗堂苤壶f堡丛望』鱼!!!丛生!型些望垒!)塑墨：丝!盟 ·论著· 百草枯人工抗原的合成及抗体的制备 杨婷婷1，孙秀兰1·”，邵景东3，王洪新1’2。(1江南大学食品科学与技术国家重点实验室，：江南大学食品学院，江苏 无锡214122；3张家港出入境检验检疫局，江苏张家港215600) [摘要] 目的：制备百草枯人工抗原和抗血清，为建立酶联 1材料和方法 免疫吸附法提供技术储备。方法：以4，4’-联吡啶和碘甲烷 1．1材料二嗯烷、无水三正丁胺、牛血清白蛋白(BSA)、 为起始原料，于暗处通氮气保护下合成了百草枯半抗原；混 合酸酐法偶联大分子蛋白载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋公司；弗氏完全、不完全佐剂购自北京生物制品研究所；四 白(OVA)制备免疫抗原和包被抗原；免疫新西兰大白兔，制甲基联苯胺(TMB)、羊抗兔IsG购自北京博奥森有限公司； 备多抗。结果：合成的半抗原经HPLC—MS、1HNMR和IR鉴 其他试剂均为分析纯。紫外可见光分光光度计Spectronie 定，初步确定合成成功；百草枯半抗原与BSA和OVA的结合 1．70为意大利GBC公司产品；Nexus670型傅立叶变换红外 比分别为19：1和14：1；抗血清经间接ELISA法检测，效价达 光谱仪为Nieolet公司产品；酶标仪M硒购自上海智理科学 l：2．56×104，经饱和硫酸铵沉淀法纯化后抗体的效价达 仪器有限公司。 1：5．12×104。结论：合成的百草枯人工抗原具有较好的免疫原 1．2方法 性，为百草枯酶联免疫检测(ELISA)蝴l盒的研制提供了基础。 1．2．1混合酸酐法合成百草枯人工抗原(1)取前期合成的 [关键词]百草枯；抗原；抗体；免疫检测 百草枯半抗原(PQ-h)16mg溶于600IxL二嗯烷中，搅拌使其 [中图分类号】R978．1+3[文献标识码】B 溶解。然后加入无水三正丁胺70止，将此混合物在4。C冰浴 中冷却，并搅拌15min。加入重蒸的氯甲酸异丁酯30止， 百草枯(paraquat，PQ)又名克无踪、对草快，化 40C左右搅拌30min。(2)52ragBSA溶于4．5mL水中，用 学名为1，1’-二甲基．4，4’一联吡啶阳离子盐，是一 0．1 种广谱、灭生性有机杂环类除草剂¨j。百草枯可经 到溶解的蛋白中，并于4℃轻微搅拌4 h，整个过程维持pH 胃肠道、皮肤和呼吸道吸收，易导致肺纤维化拉J。为 在9．0。然后，将混合物于40C对0．1啪∥LpH7．4的PBS中 了保护人类健康和环境安全，许多国家严格限制使 透析72h，每隔6h换透析液1次。冷冻干燥后于一20℃保 用百草枯旧J。我国2005年发布并实施的国家标准 J。 存。用同样的方法合成包被抗原PQ—h．OVA【5 ——食品中最大农药残留限量中规定蔬菜、柑橘、小 1．2．2百草枯人工抗原结构的鉴定所得的百草枯人工抗 麦粉中百草枯的最大残留限量分别为O．05、0