小麦糯性突变体的筛选.pdfVIP

华北农学报 2002，17(3)：14～L9 ActaAgric~turaeBoreali—Simca 小麦糯性突变体的筛选 王子宁，郭北海，张艳敏，温之雨 (河北省农林科学院粮油作物研究所，河北 石家庄 050031) 摘要：利用 SDS—PAGE技术，从河北省小麦地方品种及国内外小麦育成种 1270份中，发现 wX—B1突变体63份 ，Wx—D1突变体 4份 ，Wx—E2份。红蘖麦和白芒白等品种的发现 ，丰富了 品质育种的亲本；长穗偃麦草的蜡质基因与小麦蜡质基因不同，可以进行更深入的分子水平研 究。研究表明，地方品种和育成种具有相似的突变规律；国外优 良品质材料含有较高的Wx—B1 突变频率 ；国内以源 自北京、山西、陕西、云南 的材料突变频率最高；河北、河南、山东、江 苏等省份突变频率居中；而四川、天津、黑龙江和安徽等省份的样本量太小，突变频率也最低。 该频率分布规律为今后育成种筛选的重点提供了帮助。 关键词 ：普通小麦；地方品种 ；育成种 ；蜡质基因；突变体 中图分类号：S512．101 文献标识码 ：A 文章编号：1000—7091(2002)03—0014—06 蜡质蛋 白是结合在禾谷类胚乳淀粉颗粒上的一种蛋白，也叫淀粉粒合成酶 (GBSS)，该酶 的表达与否直接影响直链淀粉的合成。小麦的蜡质蛋 白编码基因Wx—A1，Wx—B1和Wx—D1 分别位于 7A，4A和 7D染色体上，‘已发现小麦胚乳 中直链淀粉和支链淀粉 的含量与这三个 基因的表达有关，该组基因之一尤其是Wx—B1缺失时，会导致淀粉粒合成酶含量减少，使 直链淀粉含量降低 ，支链淀粉含量增加，从而改变了小麦的淀粉构成 、面粉品质、面团加工 及食用品质。 自然界中没有天然的蜡质小麦，许多国家争先进行蜡质小麦研究 ，第一步就是突变材料 的筛选。日本从20世纪80年代末就开始了小麦的淀粉构成与面条品质关系的研究，并开始 进行育种工作，从各种来源的材料中筛选到了Wx—B1和Wx—A1基因缺失材料 ，如关东 107 和农林 67，并从一个 中国地方品种 白火麦中筛选到了Wx—D1基因缺失材料 。澳大利亚也进 行了筛选工作，但只筛选到了Wx—t31和Wx—A1基因缺失材料HJ。中国农业大学也从 内乡白 火麦和江苏 白火麦中筛选到Wx—D1缺失材料 J。上述地方品种材料 由于成熟期长、农艺性 状差而难以在育种中应用。本研究对河北省地方品种及部分育种亲本进行蜡质基因筛选 ，从 中得到适用于我 国蜡质小麦育种的亲本材料 。 1 材料和方法 1．1 试验材料 试验所采用的小麦品种为河北省为主的地方品种 784份，国内外育成种 486份。因地方 品种为混杂群体，每个品种按子粒颜色、形状等分为不同类型，每类型各取2～4粒进行电 收稿 日期：2001—07—20 作者简介：王子宁(1964一)，男，副研究员，主要从事遗传与育种方面的研究工作。 3期 子宁等：小麦糯性突变体的筛选 泳，对 电泳结果有差异的品种类型，一般再鉴定20--100粒种子，以保证结果的准确性和代 表性。所采 用 的对照 品种有：中国春，Gabo，Norin67，Halbert，Sturdv，Kanto107。 Garnaya，Satanta及荷兰小麦 。 1．2 试验方法 主要参考王子宁 J的方法，并修改如下： 1．2．1 Wx蛋 白提取 (1)将种子用钳子夹裂，放人 1．5mL离心管中，加入 0．6mL漂洗缓 冲液，4℃过夜；(2)用专用杵将淀粉块捣开 ，去掉种皮和面筋；(3)16000r／min离心 1min， 去上清 ，加入 1mL漂洗缓冲液 ，悬浮，离心去上清液，此步重复2～3次；(4)dH，O悬浮淀 粉，16000r／min离心 1min，去上清，重复2～3次；(5)按每粒小麦种子加入 0．6mL提取 液，悬浮淀粉 ；(6)100oC水浴煮沸 4min；(7)趁热离心，16000r／min离心6～10min，保留 上清液。(8)依据凝胶厚度和加样孔的大小不同，取 25--40肚L上清液进样。 1．2．2 电泳 以 170rnln×150rnln×0．7rnln垂直双板为例，采用瑞典 Pharnarcia生产的 MultipharII电泳仪及 ProteanII电泳槽 ，稳压条件下采用初始电压 130V，待溴酚