玉米单倍体的细胞学研究.pdfVIP

2003矩 1O月 保 定 师 范 专 科 学 校 学 报 Oct．2003 第 16卷 第4期 JOURNAL OF BAODING TEACHERSCOLLEGE VoL16No．4 文章编号 ：1008．4584(2003)04．0021．03 玉米单倍体的细胞学研究 魏俊杰 ，李红梅 ，刘志增 (1．保定师范专科学校 教务处，河北 保定 071051；2．河北农业大学 农学院，河北 保定 071000) 摘 要 ：用细胞学方法对 1O株玉米单倍体的体细胞和性细胞进行染色体行为观察和计数，并对体 细胞和性细胞进行 了比较 ．结果表明：玉米单倍体的体细胞和性细胞中均有一定比例的二倍体细 胞，体细胞中出现二倍体细胞的百分率平均为0．46％；在花粉母细胞 中二倍体细胞的百分率比在 体细胞中大大提高了，增加幅度最大的达到了12．86％．体细胞 中存在二倍体细胞是性细胞中出 现二倍体细胞 的前提 ． 关键词：玉米 (ZeamaysL)；单倍体；细胞；染色体 中图分类号：S513 文献标识码 ：A 单倍体指具有配子体染色体数 目的植物体…，利用单倍体进行育种可以缩短产生纯合品系的时间．1929 年Randolph和Stadler就首次报道了玉米单倍体 ，由于玉米单倍体的加倍成功率低…，单倍体技术至今 尚 未得到广泛应用 ．本研究利用孤雌生殖诱导系诱导出的单倍体为材料 ，在孕穗初期取材观察单倍体花粉母 细胞及体细胞的二倍化情况，用细胞学的方法对玉米单倍体进行研究，以期为染色体加倍提供理论依据，促 进单倍体技术在育种中的应用 ． 1 材料与方法 1．1 单倍体的获得 于 1999年夏 ，将孤雌生殖诱导系 “高诱一号”与诱导单倍体的母本材料播于河北农业大学教学实验场， 花期作杂交，收获杂交种，从中挑选单倍体籽粒 ．当选 表 1 体细胞中二倍体细胞统计结果 的单倍体籽粒 ，于下一季单粒点播 ，种植于田间，得到 Table1Statisticalresultsofdiploid cellsin somatic cells 单倍体植株 ． 1．2 取材 孕穗初期取材，剥出雄幼穗 ，用新配制的卡诺固定 液(无水乙醇：冰醋酸=3：1)固定 24h后 ，换入 75％的 乙醇中，保存于4~C的冰箱中． 1．3 染色及显微摄影 用铁矾一苏木精染色，压片，进行花粉母细胞和体 细胞染色体计数及减数分裂过程的观察 ．OLYMPUS 全 自动显微镜，乐凯ASA100全色胶卷照相 ． 2 结果与分析 2．1 体细胞染色体的观察 体细胞染色体计数(表 1)表明，所观察的 1O株单 收稿 日期：2003—09—10 ’ 作者简介：魏俊杰(1974一)，女，河北安新人 ，理学硕士，助教；刘志增 (1964一)，男，河北承德人，教授，博士生导师。 · 22 · 保定师范专科学校学报 2003年第4期 倍体花药组织中的10512个体细胞，90％以上为n=10条染色体 (图片 1)，少部分为n=20条染色体 (图片 2)，仅有两株单倍体未发现二倍体细胞的存在，每株单倍体中二倍体细胞出现的频率也不一致 ，从 0— 0．97％均有分布，平均二倍体细胞的百分率为0．46％．Khokhlov(1976)指出，二倍体细胞几乎存在于单倍体 的任何组织中，经观察发现 17800个细胞中，二倍体细胞平均 占0．42％，出现二倍体细胞的最大比例为 1．23％[41．本研究结果与前人基本一致，但这种体细胞中出现二倍体细胞的原因和过程还不清楚 ． 2．2 花粉母细胞染色体行为和计数 对 10株单倍体的5952个花粉母细胞进行了染色体计数 ，其中单倍体细胞 (n=10)为5804个 ，占 97．51％；二倍体细胞 (n=20)有 148个，占2．49％．单倍体细胞在中期 I主要以10I的形式存在(图片3)．据 Ting(1966)观察两株单倍体小孢子减数分裂发现，偶线期有56％的细胞 10条染色体以单