用正交设计优化M13mp18RFDNA转染大肠杆菌TG_1的条件.pdfVIP

第 16 卷 第 5 期 华 　中　农 　业 　大 　学 　学 　报 Vol . 16 　No . 5 1997 年 　10 月 Journal of Huazhong Agricultural University October 　1997 用正交设计优化 M13mp 18RFDNA 转染大肠杆菌 TG 的条件 1 龚炎长1) 　李 　奎1) 　彭中镇1) 　师守坤2) 　赵书红1) ( 1) 华中农业大学动物分子生物学与育种实验室 ,武汉 430070 ; 2) 中国农业大学动物科技学院 ,北京 100094) ) ( ( 4 ) ) 摘要 　采用正交设计 L 3 对影响 M 13mp 18 转染其宿主大肠杆菌 T G 的 3 个因素 :热激 9 1 温度 、时间和 DNA 量各设 3 个水平进行优化 。直观分析表明:热激温度是主要的 ,其次是 DNA 量 ,最后是热激时间。直观分析确定的较优转染条件为 :热激温度 44 ℃、时间 120 s 、DNA 量 600 p g 。验证转染试验表明:在该条件下 M 13mp 18 对 T G 的转染效率较高 。 1 关键词 　M 13mp 18 噬菌体 ; 转染 ; 正交设计 中图法分类号 　S 813 . 1 M 13mp 18 是一种单链噬菌体载体 , 以它作载体进行 DNA 克隆时 ,常利用其双链复制型 ( ) replication form , RF DNA ,将外源片段与 M 13mp 18RFDNA 相连 ,然后通过与质粒转化一样 [ 1 ,2 ] ( ) 的过程感染宿主菌 ,即进行转染 。影响转染 化 的因素很多 ,其中受试验条件影响较大的 因素 有 热 激 的温 度 、时 间和 所 用 的 DNA 量 等[3 ] 。特 通 过 正 交 设 计 的方 法 来 优 化 M 13mp 18RFDNA 转染其宿主菌 T G 的条件 。 1 1 　材料与方法 1. 1 　材料 　　试验用的 M 13mp 18 载体和宿主菌大肠杆菌 T G 来自华中农业大学作物遗传改良国家重 1 点实验室分子生物学分室 。用于制作感受态细胞 、铺板及作表层琼脂糖的培养基为 YT ,其配 制方法见参考文献[2 ] 。用于转染的 Eppendoff 管为国产管 ,购 自江苏海门万红三和仪器厂 。 1. 2 　方法 ) 　　1 感受态细胞的制备见参考文献[2 ] 。 2) 正交试验设计见表 1 。试验中包含了 3 个因素 :热激温度 、热激时间和 DNA 含量 ;每个 因素设置 3 个水平 ,其中零水平为从文献中查到或从以往试验中得到的经验数据 , 以它为基础 分别上下浮一点即为 ±1 水平 。 3) 转染效率的计算方法[3 ] 为 : 实际噬斑数 ×106