肝细胞移植的临床应用前景.docVIP

肝细胞移植的临床应用前景 　　作者：陈钟 作者单位：(南通大学附属医院肝胆外科 南通大学肝胆外科研究所，南通226001) 　　【摘要】 动物实验和初步临床研究表明肝细胞移植有望成为肝衰竭或代谢性肝脏疾病治疗的一种有效手段。在临床广泛应用之前尚需解决肝细胞供体缺乏、肝细胞保存、移植肝细胞凋亡和如何有效促进受体肝细胞再生等问题。本文对肝细胞移植的临床应用有关问题进行了阐述。 　　【关键词】 肝衰竭;先天性代谢性疾病;肝细胞移植 　　肝细胞移植(hepatocyte transplantation, HTx)是将分离、培养的肝细胞植入体内，用于肝衰竭或代谢性肝疾病的治疗，肝功能的恢复或重建，促进自身肝再生而免于肝移植，或短期支持患者过渡到肝移植。HTx有望成为肝功能替代的一种有效手段。HTx具有如下优点：一肝多用，细胞来源较广，移植技术简单，即使移植失败对受体的影响也十分微小，因而受到越来越广泛的重视[1-2]。20世纪70年代初国外开始进行HTx的基础研究，1993年美国和日本开始进行实验性临床应用，1998年美国已批准临床应用肝细胞体内移植，十余年来肝细胞移植获得较大进展，在21世纪有很大的发展前景。 　　1 HTx的适应证 　　HTx的适应证包括：(1)各种原因所致的急慢性肝功能衰竭;(2)原发性肝脏遗传性疾病包括Crigler-Najjar综合征、苯丙酮尿症、家族性高胆固醇血症、Α1-抗胰蛋白酶缺陷症、凝血因子Ⅶ、Ⅸ缺乏症、S和C蛋白缺乏症、遗传性果糖不耐受症、Wilson病、基因突变所致的脂蛋白代谢紊乱等等。 　　2 HTx的临床应用 　　2.1 移植细胞的选择 (1)人原代肝细胞 应用具有肝细胞功能最完善的人原代肝细胞是最理想的，但其来源有限，且体外培养增殖困难，肝细胞保存效果不太理想。因此长期拥有非常困难。胎肝细胞在体外可以扩增，也可在刺激下分化，免疫原性弱，但其来源受限，且存在伦理问题，临床很难推广; (2) 异种肝细胞 主要来自猪、犬、鼠、兔等实验动物。其来源广泛, 分离简便。其中猪肝细胞的应用最为广泛, 效果也最可靠[3]; (3)肝干细胞系：利用肝干细胞进行细胞移植，有望获得较好的疗效[4-6]。但肝干细胞分离技术尚未成熟; (4) 永生化肝细胞系 有学者以重组质粒SV40LT/pcDNA3.1经脂质体转染来源于正常人肝细胞，成功构建永生化人源性肝细胞系HepLL，研究表明HepLL具有正常人肝细胞的形态特征和生物学功能[7]。亦有学者转染SV40Tag基因来构建永生化肝细胞系。 　　2.2 移植肝细胞数量 要替代衰竭的肝脏功能，通常需要正常肝脏5%的细胞量，约107～109个肝细胞。 　　2.3 HTx部位选择 目前HTx的部位选择，主要有肝内移植、脾内移植、腹腔内移植等。肝脏本身的微环境及门静脉血中的营养成分，均对植入的肝细胞有益，门静脉内或肝实质内理论上应为供体肝细胞理想的植入场所。但实验发现HTx可引起门静脉力高压，重者导致广泛肝坏死，移植早期实验动物死亡率明显增加。这可能是由于植入的肝细胞直接阻碍受体肝脏的血液供应，引起肝脏的梗死和坏死，从而严重限制了肝细胞的植入数量。脾内移植是较适宜的部位，但脾脏仅能容纳不超过3%的正常肝组织，移植细胞量受限，且可引起门静脉高压。移植肝细胞可移位至肺内。脾内移植临床操作也是相当困难的，无论是开腹还是经皮脾穿刺，都有加重门脉高压和并发脾破裂之忧，移植细胞可以顺血流游走，引起肝栓塞，加重肝衰竭。腹腔内HTx，操作简单、创伤小、容量大、可反复进行[8]。但游离肝细胞腹腔内只能短期存活，移植细胞的血管化需要相对较长的时间，固定化肝细胞如微囊或胶原包裹肝细胞等方法可望解决这些问题[9]。微囊化方法与局部免疫抑制的结合可能是一种有价值的HTx策略。我们采用聚乳酸-O-羧甲基壳聚糖纳米粒子联合Ⅰ型胶原培养的异种肝细胞进行腹腔内HTx，7天后腹腔仍可见较多的存活肝细胞，发现纳米粒子有抗凋亡和抗免疫排斥反应的作用[10-11]。虽然腹腔内移植也可引起炎症反应和腹腔内感染，但这些可通过技术的改进而克服。HTx至体内其他部位如胰腺、肺脏、肾脂肪囊、皮下组织、肌肉等处，均有一定的代谢支持作用，但均不如腹腔内和脾脏内移植优越。 　　3 HTx初步临床试验结果 　　Fisher等[12]2006年总结了78例HTx的临床经验，认为其推广需要将较好的动物实验数据转变为临床资料。 　　3.1 肝衰竭 HTx的主要适应证为急性肝衰竭。当发生急性肝衰竭时即使在最好的医疗中心，也只有15%～25%的患者得以生存[13]，临床上急需新的肝移植之外的有效治疗方法[4]。Mito等[14]率先将HTx应用于肝衰