南方医科大学研究生细胞培养技术考试重点总结.docVIP

一. 细胞培养技术的概念,简史 在体外对细胞培养并进行研究的技术, 也叫细胞克隆技术. 细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。 细胞培养技术主要包括二大方面内容: 1.微生物细胞培养技术 2.动, 植物细胞培养技术 ：1) 器官培养技术 2) 组织培养技术 3) 细胞培养技术 二. 细胞培养的优点 1.得到的是活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动 2.可控制：（1）可控制-选择对象：类型： 上皮？间质？性质：正常？肿瘤？（2）可控制-调节条件：各种因素:物理、化学、生物等因素 （3）可控制-利用方法。采用各种研究技术、记录方法：研究：倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记--记录：摄影照片、缩时电影、电视-- 3. 应用广（1）学科多：（2）对象广：各种动物：低等动物--高等动物--人类；一种动物：不同年龄；不同组织: 正常或异常（肿瘤） 4.较经济：花钱较少但可得到大量、同时、重复性好的生物学性状相似的实验对象 5. 不易污染环境 三、细胞培养的缺点 1. 现人工无法完全模拟体内环境： a. 失去彼邻关系b.失去神经体液的调节和细胞相互间的影响 2. 细胞趋向单一化 3.失去原有组织结构和细胞形态 4.分化减弱或不显：要正确认识体外培养细胞是一种特定条件下生长的细胞群体。 5. 某些类型细胞还很难培养 6.大规模培养难度大 四. 体外细胞培养的方式 1.粘附型培养: 附着在某一固相支持物表面才能生长的细胞。 粘附是大多数有机体细胞在体内外生存和生长发育的基本存在方式 2.悬浮型培养: 不必附着于固相支持物表面，而在悬浮状态下即可生长的细胞。 来源:来自血，脾或骨髓， 尤以血中白细胞.癌肿细胞也可以. 特点:在悬浮中生长良好,细胞圆形，单个或小细胞团 优点 : 生存空间大，提供数量大,传代方便(不需消化),易于收获可获得稳定状态. 缺点:观察不方便, 很多细胞不能悬浮生长(尤以正常细胞) 五.体外培养细胞的生长形态分类 根据形态大致的不同，主要2类： 1.上皮样：来源：来源于外胚层，内胚层细胞如：皮肤及其衍生物, 消化道，乳腺，肺泡, 上皮性肿瘤 形态：类似体内的上皮细胞，扁平，不规则多角形，中有圆形核易相连成片相靠—紧密相连—成薄层—铺石状 2.成纤维细胞样：培养中形态与成纤维细胞类似。来源：中胚层间充质组织起源的组织如：真正的成纤维细胞：心肌，平滑肌，成骨细胞，血管内皮 形态：似体内成纤维细胞的形态，胞体梭形或不规则三角形，胞质向外伸出2—3个长短不等的突起，中有卵圆形核。 3.其它，不定型 六. 常用术语 1.细胞系（cell line）：原代培养物首次传代后，就可以称细胞系。不能或有限传代下去称有限细胞系。能连续传代的称连续细胞系。 2.细胞株：某类细胞经传代克隆并保持了该类细胞理化特征的细胞群体。 3.原代培养：直接取自生物体的组织细胞并进行培养 4.传代培养：将细胞从一个培养物内分散到另一个培养物的过程。 5.转染（transfection）：将某个基因转移到培养细胞核内。 6.lipofection：常用细胞转染剂（脂质体），它搭载基因（DNA）后形成复合物可转染到动物细胞。 第二章 细胞培养的条件及设备 一、细胞培养室 二、常用设备 1. 超净工作台； 2. 纯水装置； 3. 抽气泵； 4. 消毒装置； 5. 干燥装置； 6. CO2培养箱(孵箱)； 7. 液氮生物容器； 8. 冰箱； 9. 离心机 10. 天平 11. 显微镜 12. 过滤装置 13. 空调 14. 酸度计 15. 干燥器 三、常用消耗器材 1.培养瓶及各种相关玻璃用品、塑料用品和棉制品 2.手术器材 四、培养用液 1.天然培养基（液）：血清、鸡胚浸出液、鼠尾胶 2.人工合成培养液：合成培养基、平衡盐溶液、缓冲液、蒸馏水、消化液和抗菌素等 五、消耗性器皿的清洗、包装及消毒 第三章 细胞培养基本技术 一、原代培养基本技术：取材→漂洗→剪切→消化→计数→接种 二、传代培养技术：去旧换新液→消化→分装 三、细胞冻存及复苏技术 培养液高度：2.5~3.0mm 第四章 每代细胞基本的生长过程 一. 游离期：细胞接种后最初一段时间, 细胞在培养基中呈悬浮状, 胞体圆形 二. 贴壁期：细胞附着于支持物上 三. 潜伏期： 四. 指数增长期 影响因素 1. 细胞种类 (附着最强)巨噬细胞(30’)一成纤维 细胞——上皮细胞——血细胞(最弱) 2. 生物因素 血清、培养液中的促附着因子 3. 机械，物理等 离心：促进附着 流动：培养液流动可阻止细胞附着