干扰素-α上调肝癌细胞胸苷磷酸化酶增强氟尿嘧啶类药物敏感性实验研究.pdfVIP

干扰素-α上调肝癌细胞胸苷磷酸化酶增强氟尿嘧啶 类药物敏感性的实验研究1 肖永胜，周俭，樊嘉，赵燕，孙瑞霞，刘银坤，叶胜龙，汤钊猷 复旦大学附属中山医院，上海（200032 ） E-mail ：yshxiao@ 摘 要：目的探讨干扰素-α (IFN-α) 对肝癌细胞SMMC-7721 胸苷磷酸化酶（TP ）表达水 平的影响以及肝癌细胞对氟尿嘧啶类化疗药物敏感性的变化。方法 利用 RT-PCR 检测 SMMC-7721 细胞TP mRNA 表达水平，利用MTT 法检测肝癌细胞对氟尿嘧啶类化疗药物的 敏感性。结果 IFN-α上调TP mRNA 表达具有时间-剂量依赖性。10 000 U/ml 的IFN-α处理 SMMC-7721 细胞8 h 后TP mRNA 表达水平开始升高，至 12 h 达到峰值，此后维持较高水 平至72 h。5000 U/ml 与10 000 U/ml IFN-α处理肝癌细胞24 h ，TP mRNA 表达水平显著升 高，与未用IFN-α处理组相比，差别具有统计学意义（P0.05 ）。IFN-α能明显提高SMMC-7721 细胞对5′-脱氧-5- 氟尿苷（5′-dFUrd ）的敏感性，在10 000U/ml IFN-α作用下，5′-dFUrd 的 IC50 由102.1µM±18.4µM 降低至34.2µM±4.1µM （P0.05 ）。而IFN-α对5-氟尿嘧啶（5-FU ） 的敏感性影响不大，IC50 与对照组 6.3µM±1.4µM 相比，10 000U/ml IFN-α 作用时为 5.8µM±2.0µM。结论 IFN-α通过上调肝癌细胞SMMC-7721 TP mRNA 表达水平，显著增强 其对5-FU 前体药物5′-dFUrd 的敏感性；IFN-α上调SMMC-7721 细胞TP mRNA 表达水平 具有时间-剂量依赖性。 关键词：胸苷磷酸化酶，干扰素-α，药物疗法，癌，肝细胞 肝细胞癌已经成为严重危害我国人民健康的重要疾病之一，根治性切除是目前治愈肝癌 [1] 的主要手段，但根治性切除术后5 年复发率却高达61.5 ％ ，复发和转移是肝癌病人术后死 亡的主要原因[2] 。卡培他滨能够有效治疗肝癌切除术后的肺转移，疗效依赖于转移灶中高表 [3] [4] 达胸苷磷酸化酶（Thymidine phosphorylase TP ） 。多种细胞因子如IL-1α、TNF-α、IFN-γ 、 IFN-α[5,6]均能上调肿瘤细胞内TP 的表达或活性。本文拟研究干扰素-α (Interferon alpha IFN-α) 对肝癌细胞SMMC-7721 TP 表达水平的影响，并进一步观察IFN-α对肝癌细胞化疗敏感性 的影响。 1. 材料和方法 1.1 材料 人肝癌细胞系SMMC-7721 引自第二军医大学，用含10%小牛血清的RPMI 1640 培养 液，在 37℃、5%CO2 的培养箱中培养和传代。干扰素-α （IFN-α）：由罗氏公司上海分公司 惠赠，商品名罗扰素，水剂，450 万U/ml 。5-氟尿嘧啶（5-FU ）：由上海旭东海普药物有限 公司惠赠，颗粒剂，纯度为99.99% 。5′-脱氧-5-氟尿苷（5′-dFUrd ）：由Hoffman Roche 公司 日本分公司和瑞士总公司惠赠，商品名氟铁龙（Furtulon ），粉剂，纯度为99.99% 。 1.2 方法 1. 不同浓度IFN-α对SMMC-7721 细胞TP mRNA 表达水平的影响：将对数生长期的细 胞铺于6 孔板，培养24 h ，弃去原培养液，分别加入含IFN-α的新鲜培养液，IFN-α的浓度 分别为0、10、100、1000、5000、10 000 U/ml，继续培养24 h ，每个浓度2 个孔。利用半 1本课题得到高等学校博士学科点专项科研基金资助课题（20030246052）和上海市教委基金资助项目 （02