金鱼胚胎蛋白质双向凝胶电泳方法建立及优化.pdfVIP

第 25卷 第 2期 金 陵 科 技 学 院 学 报 V0【．25．NO．2 2009年 6月 JOURNALOFJINLING INSTITUTEOFTECHNOLOGY Jun．，2009 金鱼胚胎蛋白质双向凝胶电泳方法建立及优化 喻小燕 ，一，陈 妍2，曹 晶2，谢锦云2 (1．湖南信息职业技术学院，湖南 长沙 410200；2．湖南师范大学生命科学学院，湖南 长沙 410081) 摘 要 ：以金鱼胚胎为材料 ，以不 同样 品制备方式、裂解液成分、固相 pH梯度胶条 的选择、凝胶浓度为侧重点， 建立并优化金鱼胚胎总蛋 白质组最佳双向凝胶 电泳技术条件 。研究表 明，采用匀浆器匀浆含硫脲和 NP一40裂解 液提取蛋 白，应用pH值为 3～10的非线性 IPG胶条和浓度 14％的SDS凝胶进行双向电泳，经优化电泳 电流、时间等参数后，获得了重复性和分辫率理想的金鱼胚胎总蛋 白质双向电泳图谱，为金鱼胚胎蛋 白质组分析 奠定了基础，为揭示金鱼单倍体发育异常的机制提供了技术保障。 关键词 ：金鱼胚胎 ；蛋 白质组 ；双 向凝胶 电泳 中图分类号：Q51：Q81 文献标识码 ：A 文章编号：1672—755X(2009)02～0091—06 EstablishmentandOptimizationofTwo-dimensionalGel ElectrophoresisConditionforGoldfishEmbryosProteome YU Xiao—yan．一，CHEN Yan2，CAO Jing2，XIEJin—yun2 (1．HunanCollegeofInformation，Changsha410200，China；2．HunanNormal University，Changsha410081，China) Abstract：Todevelopandoptimizeatwo-dimensional(2一DE)gelelectrophoresisconditionforgoldfishembryospro— teome，totalproteinofgoldfishembryosisextracted．andtheoptimalconditionsforsamplepreparationand2DEare screenedbycomparingthefollowingparameters：embryosbrokenmethods，contentsoflysisbuffer，theconcentration ofgel。andlinearornon～linaerimmobilizedpH gradientgels．Theresultsdemonstratethatasatisfactory2．DEmap withgoodrepetitionandresolutionisobtainedandsuitableconditionsfor2一DEareestablished．withtheconditions0f thehomogenateofgoldfishembryos，adjustingIPGpHfrom3to10nonlinearimmobilizedpHgradientgelsandusing 14％ SDSgdaswellasoptimizingelectrophoresiscurrent．timeandotherparameters，Theresultspavesaway foranalysisofglobalproteinprofileingoldfishembryos，andlaysatechnologicalfoundationforfurtherstudyinthede— velopmentalmechanism ofgoldfishgynogenetichaploidembryos． Keywords：goldfish；embryosproteo