细胞分子生物学研究方法.pptVIP

* * 第五节 细胞分子生物学研究方法 一、原位分子杂交技术 DNA变性: 当溶液中的DNA分子处于高温或高pH值(13)条件下, 维持双螺旋在一起的碱基互补对就被破坏,DNA双链解离 成两条单链,这一过程叫DNA变性。 DNA复性: 当温度降低至合适温度或恢复pH值至中性，两条裂 解的单链按碱基互补配对原则重新形成双链结构,这一 过程叫DNA复性,又叫DNA杂交。 核酸分子杂交：按照碱基互补配对原则，将不同来源的序列互补单链的DNA/DNA，RNA/RNA，RNA/DNA，互补配对成双链杂交分子，这一过程叫核酸分子杂交。 原位杂交：用核苷酸探针对特殊的核苷酸顺序在其原位进行 杂交,叫原位杂交。可用于DNA、RNA定位研究。 荧光原位杂交（fluorescence in situ hybridization,FISH） 二、聚合酶链反应技术（polymerase chain reaction，PCR） 又叫体外基因扩增技术。 利用人工合成的一对引物， 在被扩增DNA模板链的两端 形成双链，由DNA聚合酶催 化一对引物之间的聚合反应。 具体过程： ① 变性：将双链DNA加热（95℃）使之变性，DNA双链 变成单链 ② 退火：