生物化学实验 Folin-Wu法定量测定.ppt

血糖测定的目的和意义 高血糖症：指空腹血糖浓度超过7.3mmol/L,有生理性和病理性之分，临床上最常见的病理性高血糖症是糖尿病。 　糖尿病：是一种慢性、复杂的代谢紊乱性疾病,系胰岛素绝对不足或相对不足，以高血糖症为基本生化特点。同时伴有糖、脂类、蛋白质、水、电解质和酸碱平衡紊乱，甚至出现一系列并发症如眼、肾的微血管病变及神经病变等。 　症状＋随机血浆葡萄糖≥ 11.1mmol/L,或空腹血浆葡萄糖≥ 7.0mmol/L。症状不典型者需另一天再次证实。随机血糖是指一天中的任一时间采血测得的血糖浓度。 糖尿病典型的症状是“三多一少”，即多饮、多尿、多食及消瘦 一、目的要求 1、掌握Folin－Wu法测定血糖含量的原理和方法。 2、学会制备无蛋白血滤液。 3、掌握7200型可见分光光度计的使用方法。 二、实验原理 葡萄糖是一种多羟基的醛类化合物。其醛基具有还原性，与碱性铜试剂混合加热，葡萄糖分子中的醛基被氧化成羧基， ，Cu2+即被葡萄糖还原成Cu+（Cu2O）而沉淀。 Cu2+( CuSO4 )+葡萄糖 Cu+ （Cu2O） 无蛋白血滤液中的葡萄糖和酸性钼酸盐溶液共热反应, Cu2O又把酸性钼酸试剂（Mo6+）还原成低价的蓝色钼化合物—钼蓝 。 Cu2O+酸性钼酸试剂 蓝色钼化合物 OD420比色 血滤液中葡萄糖的含量与产生的Cu2O成正比，而Cu2O的量与产生的钼化合物的量成正比。可用比色法定量的测定。 三、实验仪器 1、25mL血糖管×3支； 2、血糖管橡胶塞×3个； 3、1mL胖肚吸管×1支； 4、100mL锥形瓶×2个； 5、漏斗架×1个； 6、普通漏斗×2个； 7、水浴锅×1个； 8、电炉×1个； 9、移液管 1mL×2支; 2mL×3支;5 mL×2支;10 mL×1支; 10、滤纸×1盒； 11、吸耳球×2个； 12、7200型分光光度计×1台; 13、表面皿×1个 5、酸性钼酸盐溶液： 称取钼酸钠600g,用少量蒸馏水溶解后倾入2000ml 的容量瓶中，加蒸馏水至刻度，摇匀，倾入另一较大的试剂瓶中，加溴水0.5ml，摇匀，静止数小时后取上清夜500ml，于1000ml容量瓶中，徐徐加入225ml85%磷酸，边加边摇匀，再加25%硫酸150ml。 置暗处次日，用空气将剩余的溴赶去。然后加99%醋酸75ml，摇匀，用蒸馏水稀释定容至1000ml,贮于棕色瓶中。 2、血糖的定量测定： 取25ml的血糖管3支，编号。第一支血糖管中加入2ml蒸馏水（空白管）；第二支血糖管中加2ml标准葡萄糖液；用吸管吸取无蛋白血滤液2ml，放入第三支血糖管中。 然后向三支血糖管中各加入2ml新配制的碱性硫酸铜溶液，同时置于沸水浴中8分钟，取出，在流水中迅速冷却后,勿摇动，各加4ml酸性钼酸盐溶液。 一分钟后，用蒸馏水稀释至25ml，混匀，用7200分光光度计在420nm波长处比色，以空白管调节零点。 七、思考题 实验过程中那些操作可能影响实验结果的准确性？ 实验中，血糖管有什么作用？ 实验过程中，为什么要用流水冷却加入碱性硫酸铜液反应后的血糖管？ 附：7200型分光光度计的操作程序 连接仪器电源线，确定仪器供电电源有良好的接地性能。 接通电源，使仪器预热20分钟。 用MODE键设置测试方式：投射比（T），吸光度（A），已知标准样品浓度值方式（C）和已知标准样品斜率（F）方式。 用波长选择旋钮设置您所需的分析波长。 将参比样品溶液和被测样品溶液分别倒入比色皿中，打开样品室盖，将盛有溶液的比色皿分别插入比色皿槽中，盖上样品室盖。一般情况下，参比样品放在第二个槽位中。 将0％T校具（黑体）置入光路中，在T方式下按“0％T”键，此时显示器显示“000.0” 按 MODE键选择A模式 将参比样品拉入光路中，按“0A/100％T”键调0A/100％T，此时显示器显示的“BLA”直至显示“0.000”A为止。 当仪器显示器显示出“0.000”A后，将被测样品推入光路，这时，您便可从显示器上得到被测样品的吸光度。 * * 　　 概 述： 糖的重要生理功能 1.氧化供能 2.人体的主要组成成分之一 糖蛋白、糖脂、蛋白多糖、核糖；转化成脂肪和某些非必需氨基酸等 3.糖代谢紊乱→供能障碍→一系列代谢变化 实验 Folin-Wu法定量测定血糖的含量  血糖的来源和去路   糖尿病的诊断标准  血糖的测定方法 测定方法 酶法：（1）己糖激酶法（HK） 　　　（2）葡萄糖氧化酶法（GOD法） 特异性高，灵敏度高，干扰因素少，适用于自动化分析，为葡萄糖测定的参考方法，但是试剂较贵 无机化学法： Folin-Wu法，特异性差　　　　 有机化学