细胞工程复习2.docVIP

一、.实验室的三大组成：准备；接种；培养 1.功能与要求：A.器皿的洗涤，培养及配置，灭菌，材料处理，宽敞通风清洁防滑。B.无菌操作，封闭，干燥，长时间无菌 C.对离体材料进行培养，控光照温度，防微生物感染，干燥清洁 2.辅助实验室：细胞学实验室，生化分析实验室 3.基本设备的配置:常规设备，灭菌设备（培养基，玻璃仪器等灭菌），无菌操作设备（防止空气对流定期灭菌），培养设备（双层中空，冷光源灯管），其它设备 4.基本技术：洗涤（重铬酸钾与硫酸混合，金属；塑料；玻璃器具的洗涤） 灭菌（物理化学，控温时间）操作环境灭菌（气体熏蒸（甲醛高锰酸钾）或紫外照射） 5.培养基组成及配置（无机盐，有机化合物，生长调节物质，水，其他附加成分） MS培养基——应用最广泛 White培养基——生根培养基 N6培养基——单子叶植物离体培养 B5培养基——豆科作物的起始培养 先配成母液，使用时按比例稀释。按顺序添加 6.外植体：用于离体培养的活的植物组织、器官等材料。 （1） 外植体的取材三种来源：生长在自然环境下的植物（内源菌）、无菌环境下培养的植物、在温室控制环境条件下生长的植物 （2）外植体灭菌（不同外植体在灭菌剂浓度、时间、程序上应有所区别，教材P85） 外植体→清洗整理→杀菌剂灭菌→无菌水冲洗 （3）培养条件的控制 A.光照 光照调节：强度、时间和光质的控制。光照调节是分阶段进行的：外植体培养初期和愈伤组织增殖阶段，黑暗或弱光。器官分化阶段，高强度光照。 B.温度 适温有利于细胞分裂，而在一定范围内降低培养温度则使细胞的质量增加。而且温度的调节还与培养类型有关：组织器官粗，细胞原生质体精。 C.培养基PH 通常使用的pH值范围是5.5-6.5。pH在4.0以下或7.0以上培养物不能正常生长。pH变化的原因：外植体对各种成分吸收的差异、代谢产物的释放、高温灭菌。 D.气体调节 培养室的透气程度和培养容器的封闭程度影响气体交换，影响培养物的生长状态。培养器皿的密闭性：捆扎松紧度和材料透气性。固体培养，组织完全浸入培养基，停止生长。液体培养，振荡培养可改善通气条件。小规模培养，培养室的透气程度影响不大；批量化大规模生产，应考虑空气交换。 二、. 1.细胞全能性：一个细胞所具有的产生完整生物个体的固有能力称之为细胞的全能性。 2.细胞分化：是指导致细胞形成不同结构，引起功能改变或潜在发育方式改变的过程。 3.再分化：在离体条件下，当细胞脱分化以后，无序生长的细胞及其愈伤组织要重新进入有序生长进而才能再生个体，因此，通常把离体培养下的这一过程称为再分化 4.极性：是指植物的器官、组织、甚至单个细胞在不同的轴向上存在的某种形态结构以及生理生化上的梯度差异。 通常把离体培养中TE细胞的出现作为组织分化的标志 5.细胞脱分化：培养条件下使一个已分化的细胞回复到原始无分化状态或分生细胞状态的过程 a.离体培养下，脱分化过程发生在第一次有丝分裂之前 。静止细胞启动分裂是分化细胞成功脱分化的重要标志。 b.细胞的脱分化过程可分为3个阶段：第一阶段为启动阶段，表现为细胞质增生，并开始向细胞中央伸出细胞质丝，液泡蛋白体出现；第二阶段为演变阶段，此时细胞核开始向中央移动，质体演变成原质体；第三阶段为脱分化终结期，细胞回复到分生细胞状态，细胞分裂即将开始。 c.细胞脱分化与愈伤组织形成：愈伤组织的形成是脱分化的细胞重新进入活跃分裂的结果，但不是脱分化的过程。有些外植体的细胞脱分化以后直接形成胚性细胞进而形成体细胞胚。在组织器官培养时，愈伤组织内的细胞脱分化程度不一致。脱分化是细胞全能性表达的前题，再分化是细胞全能性表达的最终体现，细胞脱分化和再分化是离体培养过程中细胞全能性表现的基本过程。 6. 植物的离体器官发生：指培养条件下的组织或细胞团（愈伤组织）分化形成不定根、不定芽等器官的过程。 7.不定根、不定芽：指在一些非正常发生部位形成的根或芽，离体培养中通常是指从愈伤组织上发生的根和芽。器官发生方式：先芽后根 、先根后芽 、根芽同步发生 ； 器官发生过程：①、经过愈伤组织的器官发生 愈伤组织形成→生长中心形成→器官原基及器官形成 ②、不经过愈伤组织的器官发生（两种）a、茎尖培养中芽形成 b、外植体直接发生芽 8.影响器官发生的因素 ①遗传背景 ②生理状态 ③激素 培养过程中，细胞对外源激素的吸收效率和代谢途径直接影响激素的活性从而影响其培养效果。外源激素进入细胞内以后，以自由和束缚两种形式存在。细胞分裂素被外植体吸收后，在细胞内以自由碱基形式（活化形式）和核甘形式（钝化形式）两种形式存在。生长素进入细胞后，一部分以游离状态存在，另一部分则与氨基酸结合形成生长素－氨基酸复合体。 ④光照（培养条件下，光照的作用更大程