第十三章 基因治疗.doc-中南大学生物科学与技术学院-.docVIP

中南大学生物科学与技术学院 分子生物学研究中心 教 案 授课科目: 授课内容:授课对象：临床医学年制年制授课时数：学时授课：授课地点：授课时间：多媒体教学多媒体课件Human Gene Therapy？ 基因治疗是现代分子生物学技术与医学科学交叉渗透而形成的一个全新治疗领域。DNA重组、基因转移、基因克隆和表达等技术的迅猛发展，为基因治疗的飞速发展奠定了基础。 基因治疗分类 体细胞(somatic cell)基因治疗 只限于某一体细胞的基因的改变 只限于某个体的当代 生殖细胞(germline)基因治疗 对缺陷的生殖细胞进行矫正 当代及子代 第一节 基因治疗的策略 1．基因治疗的概念 定义：将目的基因导入靶细胞内，成为宿主细胞遗传物质的一部分，目的基因表达产物对疾病起治疗作用。 不同的基因治疗策略是以不同的形式利用基因产生治疗效应，因而适用于不同疾病的治疗。 2．基因置换（gene replacement） 定义：指将特定的目的基因导入特定细胞，通过定位重组，以导入的正常基因置换基因组内原有的缺陷基因。又称基因矫正（gene correction）。 目的：纠正缺陷基因，将缺陷基因的异常序列进行矫正，对缺陷基因的缺陷部位进行精确的原位修复，不涉及基因组的其他任何改变。 基因置换的必要条件： 对导入的基因及其产物有详尽的了解； 外来基因能有效地导入靶细胞； 导入基因能在靶细胞中长期稳定存在； 导入基因能有适度水平的表达； 基因导入的方法及所用载体对宿主细胞安全无害。 基因同源重组技术（homologous recombination) 又称为基因打靶(gene targeting），其实现定点整合的条件:转导基因的载体具有与染色体上的DNA相同的序列。这样，带有目的基因的载体就能找到同源重组的位点进行部分基因序列的交换。 要实现基因置换，需要采用同源重组使相应的正常基因定向导入受体细胞的基因缺陷部位。 定向导入的发生率约1/100万，采用胚胎干细胞培养的方法，这种同源重组的检出率最高可达1/10。 考虑到正常体细胞的生命周期，以及克隆筛选等实验给细胞生长带来的一系列问题尚未解决．因此用同源重组修复异常基因的方法进行遗传病的基因治疗只能作为远期目标。 3．基因添加 基因添加或称基因增补（gene augmentation）: 通过导入外源基因使靶细胞表达其本身不表达的基因。 类型:针对特定的缺陷基因导入其相应的正常基因，使导入的正常基因整合到基因组中，而细胞内的缺陷基因并未除去，通过导入正常基因的表达产物，补偿缺陷基因的功能；向靶细胞中导入靶细胞本来不表达的基因，利用其表达产物达到治疗疾病的目的。 基因添加与基因置换一样，也必须具备上面提到的5个必要条件。 4．基因干预 基因干预（gene interference）:采用特定的方式抑制某个基因的表达，或者通过破坏某个基因的结构而使之不能表达，以达到治疗疾病的目的。 此类基因治疗的靶基因往往是过度表达的癌基因或者是病毒的基因。 较常用的方法是采用反义核酸、核酶或者干扰RNA技术等抑制基因的表达。 5．自杀基因治疗 恶性肿瘤基因治疗的主要方法之一。 原理:将“自杀”基因导入宿主细胞中，这种基因编码的酶能使无毒性的药物前体转化为细胞毒性代谢物，诱导靶细胞产生“自杀”效应，从而达到清除肿瘤细胞的目的。 图示：自杀基因的作用机制（约2分钟） （一）自杀基因系统 TK/GCV：单纯疱疹病毒（herps simplex virus, HSV）Ⅰ型胸苷激酶（thymidine kinase, tk）基因编码胸苷激酶，特异性地将无毒的核苷类似物丙氧鸟苷（ganciclovir, GCV）转变成毒性GCV三磷酸核苷，后者能抑制DNA聚合酶活性，或作为DNA链延伸的终止子阻止DNA合成，导致细胞死亡。 CD/5-FC：大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（cytosine deaminase, CD）基因，在细胞内将无毒性5-氟胞嘧啶（5-FC）转变成毒性产物5-氟尿嘧啶（5-FU）。 （二）旁观者效应 概念:“自杀基因”治疗不仅使转导了“自杀基因”的肿瘤细胞在用药后被杀死，而且与其相邻的未转导“自杀基因”的肿瘤细胞也被杀死。 远距离旁观者效应：近年来又有人观察到该效应也影响到远处的肿瘤细胞，使其消除或停止生长，即远距离旁观者效应。 肿瘤细胞的消除有赖于旁观者效应，即转导自杀基因可以影响没有被转导的肿瘤细胞。旁观者效应明显地增强了自杀基因对肿瘤的杀伤作用，在相当程度上弥补了基因转导效率低的问题。 旁观者效应的机制 细胞缝隙连接；细胞凋亡与吞噬；免疫炎症反应；抗肿瘤血管生成等。 6．基因免疫治疗 通过将抗癌免疫增强细胞因子或MHC基因导入肿瘤组织，以增强肿瘤微环境中的抗癌免疫反应。