昆山口岸从中国台湾进境集装箱中截获斜斑瓜天牛和瘦躯姬天牛.pdfVIP

2009年第4期 植物检疫PLANT QUARANTINE 2．2实时荧光RT—PCR检测 2．4实时荧光RT—PCR灵敏度 图2中△Rn的变化表明，仅CGMMV出现明从图4中看出，ARn曲线增长的是携带CGM- 显的扩增曲线、而携带TRV、TMV、TRSV、ToRSV的MV的样品，而阴性对照ARn曲线没有增长。随着 阳性材料、阴性对照和H：O空白对照△Rn没有增检测样品总RNA稀释倍数的增大，Ct值也呈现递 长，表明建立的实时荧光RT—PCR方法对CGMMV 具有特异性(Ct值16．74)，而对其它4种病毒和阴 到100 性对照没有扩增(ct值为40)，结果与预期相符。 Pg感病组织中提取的总RNA。 2．3 RT—PCR灵敏度 3结论 结果表明，应用RT—PCR方法检测引物从携 本研究结合黄瓜绿斑驳花叶病毒检疫工作的 带CGMMV的样品中扩增出约284 需要，建立了该病毒实时荧光RT—PCR检测方法， bp的目标条带， 阴性材料中都未扩增出目的片段(图3)。随着检 检测结果表明，该方法具有如下优点：(1)特异性 测样品总RNA溶液稀释倍数增大，可以观察到明 强，只对黄瓜绿斑驳花叶病毒有特异性反应，与其 显的浓度梯度谱带。检测低限为10ng感病组织中它4种植物病毒均无反应；(2)灵敏性高，能检测到 提取的总RNA。 泳观察灵敏度高10倍；(3)可对病毒浓度进行粗略 定量。从图4中可以看出，荧光信号与模板的浓度 呈正相关，模板浓度越高，可检测到荧光信号所进 行的PCR循环次数越少，当样品中不含病毒的时 候，PCR循环次数达到最大值(40个循环)；(4)完 全闭管检测，PCR产物不需电泳和EB染色观察， 图3 RT—PCR检测灵敏度 · 减少了有毒物质的使用，缩短了检测时间，保护了 DNA M：DL2000 Marker；1—8：10mg、lmg、100t．qg、10p．g、1p,g、100 生态环境。 ng、lOng和1ng的样品。9：阴性对照 参考文献 1 C．Mosaicdisease AniworthG of Bid， cucumber[J]．AnnAppl 1935。22：55—67． 2 TanS a1．The structureof H，NishiguchiM，MurataM，ct genome mottlemosaic andits withthat Kyurigreen toba，movimscomparison