沙利度胺对矽肺大鼠肺组织羟脯氨酸及其FIZZ1表达的影响.pdfVIP

辛建保彭清 华中科技大学同济医学院附属协和医院呼吸科武汉430022’ 一 矽肺是尘肺中最常见、进展最快、危害最严重的一种类型，是由于长期吸入大量含有游离二氧化硅粉 尘所引起，以肺部广泛的结节性纤维化为主的疾病，严重时影响肺功能，丧失劳动能力。治疗矽肺，医学 上做了很多努力，但至今仍未研究出任何特效药物或其他特效治疗方案，目前抗矽肺纤维化治疗的研究是 肿瘤坏死因子a(TNF—a)的产生和抑制胶原合成的效果，‘已证实对肝纤维化及肝硬化具有一定疗效¨{1。 本实验通过用气管内给予二氧化硅建立矽肺模型，采用沙利度胺对实验性矽肺进行干预，用免疫组化及 响及对矽肺肺纤维化的干预作用。 1材料与方法 1．1材料 1．1．1研究对象雄性SD(Sprague 气管软骨环间隙向心端刺入，回抽空气无阻力后，将药物注入气管。空白组同等方法注入同样体积的生理 盐水。自第二天起，干预组每天按100mg／Kg将沙利度胺(常州制药厂有限公司)药粉拌入部分基础饲料 中监督食尽，然后饲基础饲料；空白组常规基础饲料喂养：上述三组动物分别于第7、30、60天各处死6 只，取出肺组织。 1．1．2标本采集～大鼠放血处死后打开胸腔取出肺脏，一结扎右侧主支气管，4向气管内灌注4％多聚甲醛一 4h．取左侧肺常 直至左肺膨胀边缘变锐，胸膜展平，结扎左倾,J_--k支气管，立即置于4％多聚甲醛固定2 RESEARCH 0℃冰箱保存。 CENTAR，INC)，行PCR检测，其余肺组织置于一7 1．2方法 1．2．1肺组织羟脯氨酸(HYP)含量测定 羟脯氨酸的含量反映了肺组织胶原的含量，用以判断肺纤维化的程度。按照羟脯氨酸试剂盒(南京建 成生物工程研究所)说明进行分析，计算肺组织羟脯氨酸含量。 1．2．2 HE染色 取石蜡切片，60C烤2‘h，二甲苯脱蜡，酒精梯度脱水后，常规HE染色。： 1．2．3免疫组化染色 X—100 h， minX3次；0．3％Triton 取石蜡切片，600烤2二甲苯脱蜡，酒精梯度脱水，PBS洗3 室温孵育20min；3％H20：室温孵育15min， 以灭活内源性过氧化物酶；10％山羊血清封闭，室温30 h或4C min；甩去多余液体，不洗；加入1：100稀释的羊抗鼠FIZZl亲和纯化多克隆抗体，37C卜2 minx 45min。0．01mol／LPBS洗 mol／LPBS洗5 3次；滴加生物素化兔抗羊I薛，37。C 过夜，0．Ol 蒸馏水洗涤； 苏 min：0．01mol／LPBS洗5minX4次；DAB显色， 5min×3次：滴加SAB试剂，37。C20 木素轻度复染， 脱水、透明、封片。同时以PBS代替第一抗体，设立阴性对照实验。阳性表达为胞质内 呈棕黄色颗粒改变。 ．520． 第十七次全陶职q￡病学术交流台论文燕 湖北宜昌 染色结果分析反应切片用t瑚IAS2000型全自动医学彩色图像分析系统分析．通过|；l：}性表达蕊位的甲均 吸光度值观察纤维化各个阶段各组肺组织-pFIZZl表运的变化。 1 2．4实时荧光定量PeR法检测FIZZlmRNA表达 按Trizol说明书提取组织总RNA．所得RNA用紫外分光光度计ISpectRophoto u 公司U-2000)测量RNA浓度并定量，模板量均取