植酸酶的研究进展及应用前景.pdfVIP

·18· 上海畜牧兽医通讯2009年第2期 植酸酶的研究进展及应用前景 赵翠燕许钦坤柯野 (韶关学院英东生物工程学院农业科学系广东韶关512005) 随着人们对绿色食品消费需求的增加和对畜牧业生产 筛选出高活力植酸酶产生菌。 与过程中生态环境保护的重视，饲用酶制剂以其高效、安全、 2植酸酶的研究现状 低成本等特点，已成为世界新型饲料添加剂研究和应用的热 由于其天然菌株产植酸酶酶量低，这造成植酸酶难以大 点。植酸酶是催化植酸(肌醇六磷酸)及植酸盐水解成肌醇 量生产及生产成本过高。另一方面，天然植酸酶的抗逆性， 与磷酸(或磷酸盐)的一类酶的总称。它使植物性饲料中磷的 尤其是热稳定性不能完全满足饲料及饲料加工的要求。因 利用率提高60％，粪便中磷的排出量减少40％，从而减少饲此，到目前为止植酸酶并没有在饲料中得到广泛的推广应 料中磷的添加量，它还可降解植酸盐的抗营养作用，因此对 用。基因工程技术的发展，为这些问题的解决提供了一条新 提高畜牧生产效益及降低其对环境的污染有重要意义。 的有效途径，已成为全世界对植酸酶研究的主要路线。 1植酸酶的来源 2．1植酸酶的基因工程 1．1微生物来源植酸酶 从大量自然存在的微生物中筛选能够产生期望性质的 植酸酶来源广泛，包括植物、动物和微生物。由于来源 酶，通过构建基因工程菌，不仅可以提高真菌植酸酶出发菌 于微生物的植酸酶作用范围和稳定性较好，易规模化生产， 株产酶量。还可以增加其热稳定性。如从自然界中分离耐高 近几年的研究大都集中在微生物来源植酸酶。产植酸酶的 温产真菌植酸酶的菌株．克隆该嗜热酶基因，在常温菌中表 微生物有丝状真菌、酵母和细菌等。丝状真菌是植酸酶存在 达，表达出的真菌植酸酶仍能保留耐热性。Mayer等(71将植 的主要领域，Shiel等¨1对200种微生物进行了筛选，发现大酸酶基因整合剜汉逊酵母(Hansenula pol”morpha)中，高密度 量的曲霉菌能产生胞外植酸酶，并由土壤中分离到的无花果 发酵后获得每升培养液13．5g植酸酶的高表达量，占该酵母 曲霉NRRL3135能产生最大的酶活性。产植酸酶的细菌有菌分泌的胞外蛋白的97％。Luis P蝴montes【8】分离一株产 枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、乳酸杆菌属(Laetobacillus)如 植酸酶耐热菌A．fumigatus，并对其基因进行克隆。转化到A． 嗜酸乳酸杆菌和干酪乳酸杆菌、链球菌(Strepoeoccus)和大肠niger中，获得了具有更宽pH范围和更高的热稳定性的植酸 杆菌(Esehcrichiacoli)等。真菌如黑曲霉是富产植酸酶的主酶。Randy 要领域，真菌产生的酸性植酸酶，其最适温度在53～70C【2】． hnuginosus菌株，也对其基因进行克隆、转化，测得转化子产 最适pH范围在2．0—6．0¨1之间，适用于胃pH值呈酸性的物中的檀酸酶酶活高于对照菌株150倍，热稳定性也有所提 单胃动物。芽孢杆菌产植酸酶具有近乎中性的最适pH值， 高。该方法存在的问题是从嗜热微生物中分离的植酸酶虽 酶括性高。热稳定性好，可广泛应用于鱼类饲料中【4J】，大肠 然在70～80℃有较好的稳定性，但在37℃往往酶括较低。 杆菌植酸酶良好的热稳定性和蛋白酶抗性也深受人们关注。 2．2植酸酶的蛋白质工程 1．2植物来源植酸酶 随着基因工程技术及分子生物学技术的发展，蛋白质工 在植物中广泛存在着植酸酶，在种子或花粉发芽时，植 程法逐渐成为人们研究蛋白质热稳定性的主要手段。通过 酸酶将植