39.2％氢气生理盐水对阿尔茨海默病大鼠海马神经细胞的保护作用.pdfVIP

生国垄至堂苤查垫!圣生!旦筮丝鲞 2％氢气生理盐水对阿尔茨海默病大鼠海马神经细胞的保护作用 周风华 吕世军 (潍坊医学院病理学教研室，山东 潍坊261053) [摘要]目的探讨2％氰气生理盐水治疗的阿尔茨海默病(AD)大鼠学习、记忆能力以及海马神经元及神经胶质细胞的形态学变化的影 响。方法雄性sD大鼠．随机分为正常对照组、生理盐水治疗组及2％氧气生理盐水治疗组，每组各10只。按6m∥kg腹腔注射三甲基锡(TMT)诱 导AD大鼠模型。按10mL／kg腹腔注射2％氢气生理盐水进行治疗，生理盐水治疗组按同样剂量进行注射。Moms水迷宫实验检测大鼠空间学习、 记忆能力．尼氏染色观察大鼠海马神经元数量及尼氏小体的变化，免疫组织化学检测c*pase-3在海乌神经元的表达．电镜观察海马神经元及胶质细 胞超微结构的变化。结果2％氢气生理盐水能显著改善AD大鼠空间学习、记忆能力障碍，抑制cmpase-3的表达活性。降低海马神经无的凋亡．保 护神经元，同时电镜检测显示海马神经元及胶质细胞的超微结构得到改善。结论2％氢气生理盐水能够改善海马神经元及胶质细胞的超微结构， 抑制细胞凋亡．保护神经组织，从『fIj提示2％氧气生理盐水对AD有保护治疗作用，其深层机制有待进一步探讨。 (关键词】阿尔茨海默病；三甲基锡；2％氢气生理盐水；caspase-3 [中图分类号】R36l[文献标识码】A [文章编号】l∞5·9∞2l加12 阿尔茨海默病(AD)的发病有多种学说．其中胶质细胞的 平均潜伏期及运动轨迹．分别测量四个不同入水点的潜伏期。 活化、炎症反应及自由基的产生引起的神经元损伤是发病机制 1-5标本采集10％水合氯醛腹腔注射麻醉，4％多聚甲醛溶 的重要环节。三甲基锡(TMT)是一种强效的神经毒剂，可引起液灌注。迅速断头处死，取脑，lO％中性甲醛固定，梯度酒精脱 边缘系统尤其是海马区神经元的损伤，从而导致学习及记忆功 水，二甲苯透明．60℃温箱浸蜡过夜，包埋框包埋，自然冷却凝 能的损害…，可作为研究AD的动物模型旧】。氢是自然界最简 固。将石蜡包埋组织连续切片，厚5岬，待用。另分离部分海 单的元素，氢气是无色、无嗅、无味、具有一定还原性的双原子 马，将新鲜组织制成I咖小块，迅速浸入预冷的3％戊二醛中 气体。氢气在生物体内具有抗氧化作用，目前已证实氢气可治 前固定，待做电镜标本。 疗多种疾病。本实验探讨2％氢气生理盐水对AD大鼠的治疗 1．6 尼氏染色切片脱蜡至水，l％的甲苯胺蓝染液。60℃， 保护作用及可能机制。 2～3 min，蒸馏水冲洗，梯度酒精分化，无水酒精脱水。二甲苯 透明，中性树胶封片，光学显微镜下观察海马CA3及CA4区神 l材料与方法 经元数量变化(放大400倍)，随机选取10个高倍视野，进行细 1．1 动物成年SD大鼠．30只，8周龄，雄性，180～200 g， 胞计数，取其平均值．并在显微图像分析系统中检测神经元内 SPF级，由山东省中医药大学提供，每笼5只，23℃～25℃，55％ 尼氏小体的灰度变化，取其平均值。 湿度．每天采光12h，常规饮食饮水。 1．7 免疫组织化学 切片脱蜡至水，3％H：0：去离子水孵 1．2 药物及实验试剂TMT由广东省职业病防治院唐小江教 育。PBs浸泡，微波抗原修复，自然冷却至室温，滴加封闭用正 授惠赠．购自美国Ac嘲。唧nics，批号：1233530l，常温无菌生 常山羊血清工作液37℃孵育，倾去，勿洗．滴加一抗c鹳p∞e-3， 理盐水溶解，4℃保存；2％氢气生理盐水由上海第二军医大学 以PBs代替一抗作为阴性对照，4℃过夜．室温放置30min，PBS 孙学军教授惠赠．4℃密闭保存；甲苯胺蓝购自美国sigTna公 冲洗，，滴加生物素标记山羊抗鼠IgG工作液，37℃孵育，PBs冲 司；兔抗人多克隆