成年大鼠和恒河猴骨髓基质干细胞体外培养与鉴定.docVIP

成年大鼠和恒河猴骨髓基质干细胞的体外培养及鉴定 冯英1谢富康2*黄锦桃1 (中山大学中山医学院组织学与胚胎学教研室，广州 510080) 摘要:本实验目的是比较成年大鼠和恒河猴骨髓基质干细胞（MSCs）原代培养的细胞形态和生长状况的差异。分别分离成年大鼠和恒河猴的骨髓，密度梯度离心法分离MSCs，传代培养。在细胞生长过程中显微镜观察两种细胞形态及生长状况的差异，并分别进行成脂及成骨诱导。结果表明，在相同的培养条件下，成年大鼠和恒河猴MSCs原代培养细胞形态比较接近，但细胞原代及传代生长状况有差异。大鼠MSCs原代培养及细胞冻存后复苏的生长均快于猴的MSCs。两种动物的细胞都可以向脂肪和成骨细胞分化。猴的MSCs因其生长缓慢和细胞形态的明显改变，需改良其培养条件，才能用于进一步的研究。 关键词:骨髓基质干细胞培养鉴定 The culture in vitro and identification of MSCs in adult rats and rhesus Feng Ying1, Xie Fukang2, Huang Jintao1 (Hostology and embryology department of Sun Yatsen university, 510080) AbstractThe objective of this experiment was to compare the difference of MSCs cell morphology and growth in adult rats and rhesus. We isolated MSCs of adult rats and rhesus and gave passage. Observed the difference of two kinds of cells in cell morphology and growth under microscope, then induced to fat cells and osteoblast respectively. The results showed at the same culture condition, MSCs of adult rats and rhesus had the same cell shapes, but had difference in primary culture and growth state. The gowth of Rhesus MSCs was slower than that of rat MSCs and cells shapes changed more much, soit need impove the culture condition. Key wordsmesenchyaml stem cell, culture, identification 骨髓基质干细胞是一类具有多项分化潜能的干细胞，可分化为脂肪、骨、软骨、骨骼肌、平滑肌以及神经元等［1］。因为该类细胞具有取材方便且对机体无害、可进行自体移植、所分化组织类型广泛等优点，对它的分化特性及机制的研究一直没有间断过［2］。灵长类动物的基因相对于应用比较多的啮齿类动物来说，和人类的更为接近。因此，如果能够获得性状稳定、可稳定传代的灵长类动物骨髓基质干细胞，并对其进行分化和移植研究，可以对此类细胞在人体的临床应用提供更为准确的依据。因此，本实验同时培养大鼠的骨髓基质干细胞和恒河猴的骨髓基质干细胞，比较两种动物的骨髓基质干细胞细胞形态和生长状况以及细胞传代的差异，为两种动物骨髓基质干细胞的进一步的分化和机制研究提供工作基础。 材料和方法 1.取材 猴骨髓的抽取：2～3周岁的恒河猴（华南灵长类动物实验中心）全麻后，俯卧位固定四肢， 无菌条件下，用16号骨穿针（肝素抗凝），从髂骨穿刺抽取骨髓10 ml，肝素抗凝。 大鼠骨髓抽提：50 g左右SD大鼠，引颈处死，剪开后肢皮肤，分离组织，取出股骨，1ml注射器吸取正常培养基冲出骨髓。 2.骨髓基质干细胞分离培养 Percoll（密度1073 g/L）分离两种动物骨髓。将抽取的骨髓加入等量的无血清L－DMEM充分混匀,转入离心管,1500 r/min 离心5 min ,弃上清及脂肪层,沉淀用无血清L－DMEM 充分混匀,轻轻叠加到密度为1073g/L Percoll 分离液上,2〖KG-*2〗500 r/min 离心30 min ,收集单核细胞层,DMEM 洗涤两次。收