水泡性口炎病毒核酸疫苗对BALBc小鼠免疫原性研究.pdfVIP

2007年第5期 水泡性口炎病毒核酸疫苗对BALB／c小鼠免疫原性研究 周学章1”，高 丰2，李元刚1，王玉炯1 (1．宁夏大学生命科学院教育部重点实验室，宁夏银川750021；2．吉林大学畜牧兽医学院) 摘 要： 成功构建了plRES—G。。基因的重组核酸疫苗质粒，用核酸疫苗免疫BALB／c小鼠，测定注射质粒 的小鼠细胞免疫和体液免疫指标相关参数的变化，评价核酸疫苗在体内表达效果。 关键词： 水泡性口炎病毒；免疫原性；pIRES—G，50。基因 中图分类号：$855．3 文献标识码：A 文章编号：1000—6354(2007)05—0008—05 1．1 水泡性口炎(VS)现已成为世界范围内A类人兽共患传 材料 染病，饮食因素、毒素、免疫紊乱和VSV感染都能引起动物 和人水泡病。节肢动物唾液在很多方面能调整脊椎动物宿 pIRESneo，由本校犬病实验室提供。 主免疫功能，将小鼠暴露在VSVNJ株感染的咬蚊环境中，感 1．2 方法 染鼠73％含有中和抗体，而经注射VSV的鼠只有11％含有 1．2．1 中和抗体，结果显示携带VSV咬蚊能加剧小鼠感染发 的设计与合成根据对G基因的序列测定结果，设计扩增引 R 病…。ZinkernagelM等拉。证实中和抗体在鼠体内对VSV 物。上游引物P，序列为5 急性细胞病变的影响，发现IgM出现较早，对急性感染的保 7一CCG- GAAGTGCCTTTTGTAC一3’；下游引物P，序列为：5 JD等¨】用杂交鼠、牛、马 调 护依赖Th依赖型的lgG。Cantlon 查 动物评价VSV—G蛋白核酸疫苗的效果，发现疫苗能诱导 EB 达载体，即plRES—G．，。o。 研 抗体产生，在不同动物产生抗体滴度不相同。Flanagan 等¨o通过将N蛋白基因从转录起始部位去掉，使得病毒毒 1．2．2质粒的制备将含有目的质粒(pMDl8一T—G。，。。， 究 力减弱和完全失去致病力，然后将致弱病毒与G蛋白基因连 plRESneo)的细菌接种于100ml含50肛g／mlAmp的LB培养 接在一起，制备基因疫苗，免疫猪对野生性VSV具有抵抗作 基中，然后提取质粒。 用。本研究旨在用构建的真核表达载体质粒免疫BALB／c1．2．3 限制性内切酶水解反应 将pMDl8一T—G。。、 小鼠，考察所制备核酸疫苗的免疫活性，为该疾病的预防提 I和NotI进行酶切反应。 plRESneo分别用BamH 供依据。 1．2．4DEAE一81纤维素膜电泳吲收将处理好并剪成适 1材料与方法 ml