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猪肝基因组DNA的分离纯化及鉴定 猪肝基因组DNA的分离纯化及鉴定 猪猪肝肝基基因因组组DDNNAA的的分分离离纯纯化化及及鉴鉴定定 摘要 利用十二烷基硫酸钠（SDS）裂解猪肝组织细胞，用氯仿、异戊醇抽提蛋白质以分离核酸，然 后用盐溶法分离出DNA，用冷乙醇沉淀，最后分别用紫外分光光度法和二苯胺显色法测定DNA纯 度，并比较二者的结果。 关键词：DNA 纯化 鉴定 紫外分光光度法 二苯胺 Separation,purificationandidentificationofgenomicDNAin porklivercells Abstract: Abstract: AAbbssttrraacctt:: In our experiment the lysis of pork liver cells is accomplished with sodium dodecyl sulfate(SDS) . And the protein is separated with chloroform and isoamyl alcohol and the nucleic acid is obtained . Then DNA is separated by concentration of NaCl . Finally the ultraviolet spectrophotometry is usedtodeterminethepurity. Keywords: Keywords: KKeeyywwoorrddss::DNA;Purification;Determination; ultraviolet spectrophotomentry;Diphenylamine 核酸研究的首要方法是分离和测定。核酸制备中需要注意的共同问题是防止核酸的 降解和变性，要尽量保持其在生物体内的天然状态。故必须采用温和的条件，防止过酸、 过碱、避免剧烈搅拌，尤其重要的是防止核酸酶的作用。天然核酸都具有生物活性，这 是检验其质量的重要指标。物理化学指标也常用来评定核酸的品质，这些指标包括：相 对分子质量，紫外吸收，沉降系数，电泳迁移率，粘度等。制备方法的不同因材料的不 1 1 11 同而有很大差异 。 本实验用新鲜猪肝为材料，用盐溶法提取、冷乙醇纯化（沉淀）DNA，并用紫外分 光光度法测定其纯度，获得了较好的效果。 1 1 11 材料与方法 1.1 实验材料 1.1.1 溶液与试剂 4g SC 2.94g 9.0g 1L 新鲜猪肝 ； 缓冲液： 柠檬酸钠和 氯化钠溶于 蒸馏水，并用盐酸 pH=7.0 5%SDS 95% DNA 调至 ； 溶液； 冷乙醇（于冰箱中冷藏后使用）；氯仿；异戊醇； 1g 100mL 10mL60% 标准溶液；二苯胺试剂： 结晶二苯胺溶于 分析纯冰醋酸中，加 过氯 酸，混匀，临用前加1mL1.6%乙醛溶液。 1.1.2 实验仪器 冷冻离心机；烧杯；量筒；玻璃棒；三角烧瓶；离心管；紫外分光光度计。 1.2DNA的提取 1.2.1 实验原理 RNA DNA 0.14M 根据 与 在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离：在 的 1 RNA DNA 1M 氯化钠溶液中， 核