病理组织中提取RNA的方法学研究.pdfVIP

第42卷第5期 山 东 大学学报 (医学版) V01．42No·5 SCIENCES) Oct·2004 OFSHANDONGUNIVERSITY(HEALTH 2004年10月 JOURNAL 文章编号：1671—7554(2004)05-0613-02 —一——————————————————————————————————————————————————————————————————～ 病理组织中提取RNA的方法学研究 马晓丽--2，黄淑红1，汪运山2，谢经武3，张红卫1 (1．山东大学生命科学学院发育研究所，山东济南250010；2．山东大学临床医学院济南市中心医院中 ofTexasMedical Texas77555—1048) 心实验室，山东济南250013；3．UniversityBranch，Galveston [关键词】病理学，临床；石蜡包埋；RNA；方法学研究 [中图分类号】Q522．6【文献标识码】B 医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组 酶K缓冲液，匀浆组织，然后向1、2、3、4号管分别 织，是分子生物学研究材料的重要来源之一。1988加入蛋白酶K10、10、20、30斗1，45℃下分别孵育 2、2、3、6h或过夜，使组织完全消化。加入醋酸钠 年，Rupp，Locker成功地从蜡块中提取出RNA， (1 结束了RNA研究依赖于新鲜或冰冻探针的历史， Ixl／mg)，翻覆颠倒4-5次，再加入等体积苯酚： 扩展了它在分子生物中的应用范围，这对诊断与 氯仿：异戊醇25：24：1，颠倒4～5次，剧烈振荡10s， 鉴别诊断研究及评估患者预后具有重要价值“J。但 是， 目前提取RNA方法尚不统一，仍存在时间 上清转入DEPC处理过的洁净的1．5mlEP空管 长、用量大、易降解等缺陷。为此，我们设计4种从 中，对应编号1、2、3、4。加等体积的异丙醇混匀，一 石蜡组织中提取RNA的方法，通过比较以期从石 20℃，沉淀1h(或一70℃，30rain)。4℃，10 000xg， 蜡组织得出一种快速、经济、有效提取RNA的方 离心20min。取沉淀，用50斗l75％冷乙醇洗沉淀， 法。 4℃，10000xg，离心10min，2次。弃上清，空气中 1材料与方法 晾干沉淀。然后加20斗IDEPC水溶解RNA片刻。 1．1材料与试剂 再加DNaseI消化DNA，37oC，1h(使DnaseI失 1．1．1组织来源2001年一2003年山东大学齐鲁活)后，一20℃保存。 医院手术切除、山东大学生命科学学院发育所常 1．2．2 RNA检测1％琼脂糖凝胶电泳，上样顺序 规石蜡包埋的档案组织 依次为：1、2、3、Marker、4，各上样2汕l，100V，电泳 15 1．1．2试剂蛋白酶K缓冲液：0．5 min，凝胶成像系统下观察电泳结果。利用分光 mol／LTfis．C1，pH mol／L mol／L 7．6；0．04 EDTANa2；0．02NaCl；l％ mg／IIll；RNA提取 SDS。蛋白酶K(Promega产)：20 试剂盒(Promega产，均购自华美公司)。 OD280比值1．8为标