皮肤保护和二核甘酸含量检测.docVIP

皮肤保护中的二核甘酸检测 Skin-protecting dinucleotide examined Karin Cucumel,ISP Global Skin Research Center,France Raid Domloge,ISP Global Skin Research Center,France 文献来源：Published January 2008 personal care 翻译：吕晓滕 摘要 压力作为我们生活中的一大要素正在变得越来越明显，大量的数据表明压力对人类皮肤的健康和老化有着直接的影响。压力可能来自于环境污染，天气状况，吸烟，放射物，重金属和紫外线等等。 在导致压力的众多因素中，紫外线是导致皮肤光老化的主要诱因，这是由于紫外线能够对皮肤中的胶原，弹性蛋白，黑素细胞和皮肤的栅栏组织，并引起皮肤褶皱，松弛，不均匀的皮肤斑点，黑斑和皮肤干燥。因此，开发一种能够对抗皮肤老化和和压力的活性物质便成为化妆品行业研究中的一个热点。 位于法国安蒂波利斯地区的ISP全球皮肤研究中心曾经开发了一种化妆品活性物质，该物质是通过生物技术的方法从一种生活在hypermineral湖中的卤虫体内获得的，当环境变坏时，卤虫进入休眠状态，在休眠状态下卤虫能够压缩并加速形成一种至关重要的分子，GP4G，这是一种主要用于DNA保护的具有很高潜在势能的物质，同时也是一种储能物质。 当环境条件适合时，卤虫就会从休眠中醒来并萌发，然后进行一种不同于上述途径的代谢过程。最终，GP4G转变成为ATP。GP4G为卤虫的生命活动提供能量并保证卤虫的安全与进化，本研究的主要目的就是证明GP4G应用于皮肤后能够通过为肌肤提供能量的方式来保护DNA，对抗中波紫外线和皮肤老化以保证大部分的皮肤细胞出于一个良好的状态。 材料与方法 人类成纤维细胞由细胞培养获得，皮肤外植体由整容外科获得，然后，采用了一个确定皮肤组织的培养方案，HaCaT细胞株由美国菌种保藏中心获得，人类成纤维细胞用卤虫提取物处理24小时，然后暴露在中波紫外光下，24小时后做一个MTT溴比色测试。 培养的皮肤样品用标准的直接免疫荧光反应的方法来检测，用兔子的多克隆抗体抗-Hsp-70进行热休克蛋白的研究，老鼠的抗-CD1a细胞进行朗格汉斯细胞染色检测。 用12%的NuPAGE凝胶按照前面提到的方法进行免疫印迹实验，兔子的抗胶原多克隆抗体抗体与小鼠的单克隆抗体通过TEBU购买。 彗星实验（单细胞凝胶电泳）是一种能够检测单细胞中单链DNA或双链DNA断裂的短距敏感的微电泳技术，简单地说，经过处理以后，细胞最终进入了琼脂糖凝胶并溶解在一种高盐的去垢剂缓冲液中，在单细胞凝胶电泳之后，将DNA在碱性溶液中变性，然后用碘化丙啶处理。受损细胞内的DNA会向正极移动，移动的速度与细胞碎片的数量呈正比，这样就会在凝胶上面形成一道“彗星”。损害评估通过一个能够帮助探测DAN损伤百分比的软件来进行。 在人类角质细胞接收UVB100mj/cm2照射之前或之后的24h内加入卤虫提取物，加入卤虫提取物24h之后采用原位缺口末端标记技术（TUNEL测试技术）进行检测。 人类的HaCaT细胞通过酶联免疫反应（ELISA）技术进行检测，HaCaT细胞在接受UVB照射24h后加入3%的卤虫提取物。并通过IL-1α，IL-8和TMF-α的水平来评估总细胞因子。细胞因子的水平用pg/mg蛋白表示。 结果 为了证明细胞的新陈代谢被激活，预先测定了纤维母细胞中的ATP含量。利用安玛西亚公司的cAMP竞争性免疫测试系统，我们测得ATP的含量比本底水平上升了40%。 GP4G是ATP的前体物质，并且也被证明具有能够提供能量的特征。在卤虫生长的环境中，当周围的环境适合时，卤虫从休眠状态苏醒，卤虫体内的GP4G的含量迅速下降，而ATP的含量却上升明显。GP4G机制被认为是一种能够使卤虫在严酷环境中生存下来的原因。当面临严酷的环境时，卤虫体内开始加速形成一种重要的分子GP4G，其中含有典型的高能磷酸键。有趣的是，我们发现在环境恶劣的条件下，GP4G是由一种能够为ATP的形成提供能量的能量供体，储存于ATP中的能量在环境适宜时释放出来。因此，GP4G在别的生理条件或在人体细胞中，能够激活c-AMP依赖的代谢途径。 表皮和真皮的再生 免疫染色和免疫印迹试验发现，在HaCaT细胞中丝聚蛋白和角蛋白的含量都有明显的增加。这项研究显示卤虫提取物能够刺激丝聚蛋白的合成，并因此促进表皮的分化。同样的，我们也证明了，在一些经过纤维原处理的细胞中，真皮蛋白如纤连蛋白和胶原蛋白也有大幅的增长。GP4G能够通过诱导丝聚蛋白和胶原蛋白的合成来提高皮肤的栅栏功能，不仅如此，GP4G通过诱导胶原蛋白和纤维原蛋白的合成，还