DNA测序常见问题图谱.pdfVIP

上海实验室：上海市徐汇区银都路218号 聚科生物楼2号楼 201室 邮编：200231 电话：800-820-8982- 1-1 Email ：seqsh@invitrogen .com 北京实验室：北京亦庄经济技术开发区荣昌东街7号隆盛工业园203 邮编：100088 电话：800-820-8982-1-1 Email ：seqbj@invitrogen .com 广州实验室：广州市海珠区新港东路2429号 海珠科技大楼 213室 邮编：510320 电话：800-820-8982- 1-1 Email：seqgz@ 1. 酒精峰和染料峰 辨别要点：一般情况下这样的峰形出现在前 200bp 的某部分.大部分情况下是不影响测序 结果的. 解决方案：重新安排反应 2. 由引物降解引起的双峰 辨别要点：每个峰下都有后一个碱基颜色的小峰，且显然是后面的碱基向前移了一个。这是 很轻微的移码现象，如果降解严重，将无法判读。 解决方案：更换引物测序 3. 由困难结构导致的信号中断 辨别要点：在某一碱基或一段区域后峰形突然变得杂乱，无可用信号，一般在 AG rich region/TG rich region/GC rich region/G or C rich region 等后易发生。 上海实验室：上海市徐汇区银都路218号 聚科生物楼2号楼 201室 邮编：200231 电话：800-820-8982- 1-1 Email ：seqsh@invitrogen .com 北京实验室：北京亦庄经济技术开发区荣昌东街7号隆盛工业园203 邮编：100088 电话：800-820-8982-1-1 Email ：seqbj@invitrogen .com 广州实验室：广州市海珠区新港东路2429号 海珠科技大楼 213室 邮编：510320 电话：800-820-8982- 1-1 Email：seqgz@ 解决方案：我们目前针对此类困难模板使用新的反应体系，成功率大大提高，但并不能保证 100%出正常报告。为了更快得到满意结果，如果您的样品序列含有二级结构的，请在订单 备注中注明。 4. POLY A/T/C/G 辨别要点 :长串的连续 A/T/C/G 碱基，一般在这种结构后峰形会变乱，但也有可以测得过去 的 可能。遇到这种情况请反向测序，然后进行拼接，得到全序列。 重复序列的测定是目前荧光测序方法的一个局限。我们目前的原则是对于质粒 DNA (闭合 双 链)上当存在 polyT/A/G/C 结构时无论之后的信号质量如何，我们都会将报告发出，在 PCR 模 板上这个限制的长度为 15 个碱基。相对 A 和 T ，G/C 的影响更大一些，无论在 何种模板上 只要出现连续 10 个的 G 或 C，不管之后的信号质量如何，我们都会将报告发 出。由于这是 样品的内在原因。这类问题我们应该同正常测序一样，给客户报告，反应按 正常收费。由于 这样的重复序列对测序结果的影响是绝对的，所以还请测序客户在选择引 物时尽量避开有重 复序列的一端。 5. 重复序列 辨别要点：明显的长串类似碱基组成的结构重复，一般这种结构会导致信号的中断或者衰减。 解决方案：从反向测序 6. 混合克隆 上海实验室：上海市徐汇区银都路218号 聚科生物楼2号楼 201室 邮编：200231 电话：800-820-8982- 1-1 Email ：seqsh@invitrogen .com