DNA测序技术新进展.pdfVIP

230 国外医学临床生物化学与检验学分册 　2000 年第 2 1 卷第 5 期 DNA 测序技术新进展 ( ) 上海第二医科大学 上海市医学检验重点实验室 200023 　王 　强 综述 　罗 　伟 审校 ( ) 　　摘 　要 　分子诊断技术在遗传性疾病 、肿瘤和感染性疾病的诊断领域内占有重要的位置 ,DNA 测序 DNA sequencing 为其中 最精确的一种方法 ,主要用于鉴定基因 ,检测突变 ,分析噬菌体文库等方面 。本文介绍了DNA 测序技术近年的新进展 。 关键词 　DNA 测序 ;分子诊断技术 　　1977 年 Sanger 创立了链终止反应测序法 ,他用 95h ;Utah 的 Swerdlow 和 Gesteland 改在高电场下进行 放射性同位素标记的双脱氧核苷酸终止 DNA 链的延 电泳后 ,大大地提高了分析速度 。毛细管电泳仪的两 伸 ,产生序列梯度 ,再由高分辨力的聚丙烯酰胺凝胶 个电极室由一根毛细管相连接 ,有利于快速散热 ,适 μ 电泳分离 ,放射 自显影读取结果 。1986 年 Hood 实验 宜在高电场下运行 ;毛细管内径通常为 20 ～200 m , μ 室的 Smith 用四色荧光标记的测序引物 ,单一泳道电 长度为 10～100cm ,最大承载电流 100 A ,适宜电场强 ( ) [ 1 ,4 ] ( 泳 ,激光诱导荧光法 L IF 进行测序 ,使测序方法由手 度 200 ～400V/ cm 。毛细管凝胶电泳 capillary gel 工进入 自动化操作 ; Prober 则是用荧光标记双脱氧核 ) elecrophoresis ,CGE 把传统的凝胶板电泳方法引入 CE 苷酸链终止法进行测序的 ,这两种方法分别被 Perkin 技术中 , 用聚丙烯酰胺或琼脂糖灌注毛细管 , 对短 Elmer 和 Dupont 公司商品化为测序仪 。荧光标记法 DNA 片段具有很高的分辨率 ,精确度达 05bp ,分离 是医学和生物学检测领域中取得的重大突破 , 目前的 180～200bp 序列效果最好 。CGE 的缺点是其基质易 DNA 测序方法多建立于其基础之上 , 荧光标记 自动 于被高电流所破坏 ,故运行时间受到一定的限制 ,寿 化分析仪 已成为 DNA 测序技术进步最 明显 的标 ( 命约为 10～15h 。羁滞溶液毛细管电泳 entangledso 志[ 1 ,2 ] 。近年来又有人研制 了毛细管列阵 电泳和 lution capillary electr