RNA干扰的研究进展及其应用.pdfVIP

+455· 垦丛匡堂堕鏖生塑垡堂生垫坠堂坌盟垫堕生!旦箜垄鲞箜!塑皇!g也垦堂!里鱼堡!塑型里塑塑型墅：!堂!翌堕!型堑!№! ·综述· RNA干扰的研究进展及其应用 郭颖综述府伟灵审校 【摘要】RNA干扰(RNAi)是利用同源性双链RNA诱发序列特异的转录后基因沉默(PTGS) 现象，它可以通过使mRNA发生降解而抑制蛋白表达。在RNAi过程中，外源的双链RNA在体内会 被切割成小片段，合成新的小干扰RNA(siRNA)。近年来RNAi的作用机制假说正被逐步修正。从 利用体外合成双链RNA，到通过质粒稳定表达siRNA诱发RNAi现象，这项技术正不断完善，并被 广泛应用。由于RNAi技术的高效性和特异性，它已经成为基因功能研究的一种新方法，并展现出广 阔的前景。 【关键词】RNA干扰；基因沉默； 小干扰RNA 近年来的研究表明，一些小的双链RNA可以高类的几乎所有的真核生物细胞中m2|。 效、特异地阻断体内特定基因表达，促使mRNA降 RNAi的作用机制 解，诱发细胞表现出特定基因缺失现象，称为RNA干 扰(RNAinterference，RNAi)。RNAi是细胞本身固在线虫体内，RNAi引起的转录后沉默分为两个 有的对抗外源基因侵害的一种自我保护现象，是双链 重要阶段[3]。第一个阶段为起始阶段，是长链dsR— RNA(doublestranded RNA，dsRNA)分子在mRNA 水平关闭相应序列及基因的表达使其沉默的过程，是 片段(smallinterfering silen— 一种转录后基因沉默(post—transcriptionalgene 程。第一阶段需要特异识别双链RNA酶。该酶属于 cing，PTGS)。RNAi技术的应用领域已经从基因组 学研究逐步扩展到临床领域，并成为基因治疗手段。 RNAi不仅提供了一种经济、快捷和高效的基因表达 抑制技术手段，而且在功能基因组研究和基因治疗等 ATP依赖的方式逐步切割由外源导入或者由转基因、 方面，开辟了一条新思路。 RNAi的发现 沉默复合物(RNA—inducedsilencingcomplex， 1995年，Guo等在对线虫的研究中试图用反义 RNA去阻断par．1基因的表达，以探讨该基因的功 能，并同时在对照实验中给线虫注射正义RNA，以期 观察到基因表达的增强，但得到的结果是二者都同样 地切断了par一1基因的表达途径。这与传统上对反义 RNA技术的解释正好相反。该研究小组一直未能对 正义链和反义链识别与之互补的mRNA，启动其特异 这个意外发现给予合理解释。 的降解作用。在线虫体内，几个dsRNA分子就可以 1998年，Fire等首次将dsRNA～正义链和反义链 的混和物注入线虫。他们发现Guo等遇到的正义能存在某个信号扩增的步骤，即RNAi的放大效应机 制，这表明RNAi可以扩增到临近的区域，这种现象 RNA抑制基因表达的现象，以及过去的反义RNA技 术对基因表达的阻断，都是由于体外转录所得RNA 中污染了微量双链RNA而引起。经过纯化的双链 RNA RNA，能够高效特异性阻断相应基因的表达，其抑制 dependent 基因表达的效率比纯化后的反义RNA至少高2个数 量级。该小组将这一现象称为RNAi。 随后的研究发现，RNAi现象广泛存在于从植物、蠕虫中[6]。但这种现象只存在于植物和蠕虫中，在哺 真菌、线虫、昆虫、蛙类、鸟类、大鼠、小鼠和猴，乃至人 乳动物细胞中还没有得到证实。