牛脾脏中μ钙激活酶的分离纯化方法研究.pdfVIP

牛脾脏中u一钙激活酶的分离纯化方法研究 黄明，藏大存，徐幸莲，赵莲，周光宏水 (南京农业大学农业部农畜产品加工与质量控制重点开放实验室，江苏南京 210095) 摘要：本试验旨在通过采用多种生物学分离手段和多个分离步骤从牛脾脏中分离纯化u一钙激活酶。对宰后30IIlin 黄牛脾脏通过匀浆后利用超高速冷冻离心、离子交换层析、疏水层析、分子筛等技术，从中分离纯化出了p一钙 激活酶，最后得到的扯一钙激活酶的比活力为38．4U／mg。并对分离纯化过程中各主要步骤u一钙激活酶的总活性、比 zymography)对纯化过程中的样品进行了鉴定。 关键词：u一钙激活酶；纯化；柱层析：活性电泳；变性不连续电泳 on ofP_urifica_幻nof StudyMe也0dology mCalpaill自眦Ca蜘【eSpleen HUANG Lian，ZHOU Ming，zANG Da—cun，XUⅪng—liaIl，ZHAOGuang-hong水 of AmiInalProducts (KeyLabor鲕DryAgricllltu蕊arId Processing锄dQuali够Con缸_ol，Minisn了ofAgriculture， 210095，Cbina) N觚jingAgriclllturalUniVers时，N觚jing oftllis isto c砌e aVariety memods Abst眦t：-11le删ectiVesmdypllri匆u-Calpaill舶mspl咖byapplying ofbiological 30min such 矗nd镒鲐{f尊ntproc。d妇fI≥s．1I己豳yenowca材沁spleen(wimiIlpos锄10rtem)wassampled觚d仃eatedwi血procedures as sieVeexclusionetc．Inthelast homogenization。iollicexchange’hydrophobicchromatography，molecular step，tlle was total aIldo出er spec抵枷vi哆ofr{esmtantmCalpain38．4U／mg．Me锄wllile，吐lea砸vi哆andspecmcactiV时ofu-Calpaill relate；datdiffe啪t detected蛐dVerified ofSDS—PAGEandcasein majof paB觚neters purificationprocedures、)l旧re byway zymography． words： 1【ey p—Calpain；purification；column 中图分类号：Q55 文献标识码：A 嫩度是决定肉食用品质最重要的指标，肉类动物在 动物的各种组织中的钙激活酶系统，包括u。钙激活酶、 宰后一段时间内，由于尸僵的发生，嫩度会降低，而 m．钙激活酶及其两种同工酶的内源性的专一抑制蛋白 在随后低温(0～4℃)贮藏过程中嫩度又逐步得到改善， 这一过程被称为成熟。但研究发现不同动物种类、年 等多种类型【。为了澄清u一钙激活酶在肉成熟中的作用 龄、部位、宰前管理对成熟的速