木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达及表达蛋白的纯化.pdfVIP

维普资讯 第22卷第 3期 无 锡 轻 工 大 学 学 报 V0】．22 No．3 2003年 5月 JournalofWuxiUniversityofLightIndustry May 2003 文章编号：1009—038X(2003)03—0057—05 木聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达及表达蛋 白的纯化 薛业敏 ， 曹建平， 毛忠贵， 邵蔚蓝 (江南大学 工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡 214036) 摘 要：热海栖热袍菌Thermotogamaritima是一个嗜极端高温的厌氧细菌，其产生的耐高温和 热稳定性的木聚糖酶 B具有很好的工业应用前景．利用 PCR技术将嗜热产 乙醇菌 T．maritima 编码高度热稳定性木聚糖酶的基因克隆至原核表达载体 pET一20b，使之与组氨酸标签融合，并在 大肠杆菌JM109(DE3)中得到 了高效表达．最后采用金属 Ni2螫和层析柱对基 因表达产物进行 了 纯化 ． 关键词 ：木聚糖酶 B；PCR扩增；表达 ；纯化 中图分类号：Q786 文献标识码 ：A ExpressionofXylanaseB GeneofThermotoga maritima inEscherichiacoli XUE Ye—min， CAOJian—ping， MAO Zhong—gui， SHAO Wei—lan (TheKeyLaboratoryofIndustrialBiotechnologyunderMinistryofEducation，SouthernYangtzeUniversity，Wuxi214036．China) Abstract：Thermotogamaritima isoneofthefew hyperthermophilicbacteriadescribedtodate．The xylanasesfcIundinT．maritimahasshowntheextremelythermostablityandconsiderablepotentialin large-scaleproduction．ThegeneofxylanaseB from T． 71laritime ATCC 43589 wasamplified by PCR，inserted intotheplasmidpET一20b，andfusedwith the6-Histag．Theresultantrecombinant plasmidpET一20b—XynBwastransformedtOE．coliJM109(DE3)．A geneproductbandcanbeesen withSDS—PAGE．Therecombinantproteinwaspurifiedbyheatingand immobilizingmetalaffinity chromatography． Keywords：xylanaseB；PCR amplification；expression；isolation 木聚糖酶是一类水解木聚糖主干链 内部 口一1，4 染[4--8j．由于纸浆漂白工序的环境是温度较高的碱 木糖苷键 的酶，多数作用于木聚糖的无侧枝区段， 性，这就要求木聚糖酶具有耐热和耐碱 的特性．目 产生低聚糖或带有侧枝的寡聚糖l1~3j．该酶不仅在 前，人们 已从 自然界分离到许多产木聚糖酶的菌 食品、饲料、纺织、能源工业中有着广阔的应用前 株，但往往都存在着产酶不高或耐热耐碱不够 的问 景，而且在农作物残渣的利用，特别是在纸浆造纸 题．因此，运用现代分子生物学技术构建符合人们 工业 中用于纸浆漂 白，能够提高纸浆 白度，降低后