激光共聚焦显微技术在乳腺细胞凋亡研究中的应用.pdfVIP

第 40卷 第 3期 东 北 农 业 大 学 学 报 40(3)：121-125 2009年 3月 JournalofNortheastAgriculturalUniversity Mar．20o9 文章编号 1005—9369(2009)03—0121—05 激光共聚焦显微技术在乳腺细胞凋亡研究中的应用 曲 波，李庆章 (乳品科学教育部重点实验室，东北农业大学 哈尔滨 150030) 摘 要：激光扫描共聚焦显微镜(LSCM)是普通荧光显微镜、激光和计算机及相应软件组合的产物，它实现了 连续光学切片，并广泛应用于活细胞三维重构及动态分析。乳腺细胞凋亡是乳腺生物学的重要研究内容 ，是乳腺 发育、泌乳及退化过程的一个关键特征。近年来有关乳腺细胞凋亡的研究已经有了长足进展，文章综述 了激光扫 描共聚焦显微镜技术在乳腺细胞凋亡研究中的应用。 关键词：激光扫描共聚焦显微镜；乳腺；细胞凋亡 中图分类号：Q932 文献标识码：A 激光扫描共聚焦显微镜 (LaserScanningCon— 速延伸、发情周期或月经周期导管生长的加快或减 focalMicroscope，LSCM)是 2O世纪80年代发展起 慢等。大部分凋亡发生在乳腺导管末端的小叶单 来的一种新型高精度显微镜。它在普通荧光显微 位。乳腺导管末端的细胞在妊娠期以前一直处于静 镜的基础上加装激光扫描装置 ，使用可激发的荧 止状态。妊娠开始后，动物机体通过多种内分泌激 光探针 ，采用敏感的光电倍增管作为检测器 ，利 素和调控因子促使乳腺导管上皮细胞迅速分化，乳 用计算机控制扫描反射镜并进行图像采集、处理 腺导管出现分枝，乳腺小叶开始增生。当哺乳期结 和分析lJ【。激光扫描共聚焦显微技术不仅可用于观 束后，乳腺开始进入退化过程，伴随着大量乳腺上 察各种 固定的细胞和组织，还可对活细胞的形态、 皮细胞的凋亡，乳腺组织开始重构并逐渐恢复到妊 结构和离子的变化进行实时动态观察和测定[21。目 娠前的状态，从而为下次的妊娠做好准备 。乳腺 前 ，这种技术已用于细胞形态定位、三维结构重 细胞的增殖、分化和凋亡处在一个动态平衡之中， 建、细胞 内离子动态变化过程等研究 ，并与定量 这对于乳腺的发育和泌乳性能至关重要嘲。 荧光测定、定量图像分析等实用研究手段和技术 1 LSCM与乳腺细胞凋亡的形态学检 相结合，在形态学、生理学、免疫学 、遗传学等 测 分子细胞生物学领域得到广泛应用3[1。 细胞凋亡(Apoptosis)是多细胞生物调节机体发 乳腺细胞凋亡的形态学变化主要包括腺泡结构 育、维护 内环境稳定、内基因调控的细胞主动性 受损、细胞外基质重构等。另外，乳腺组织在细胞 死亡过程4【】。乳腺是哺乳动物较为特殊的组织 ，它 凋亡过程中存在大量亚细胞水平的形态变化，如胞 能在两个不连续的时期 内(青春期和妊娠期 )继续 体收缩、核质固缩聚集、细胞器完整但紧密压缩、 发育。在这两个时期 ，乳腺细胞的增殖和分化有 染色质浓缩于核膜周边、附膜凋亡小体形成及 自体 明显改变l5】。细胞凋亡是乳腺发育、泌乳和退化过 吞噬现象等5J【。 程中的一个关键特征 ，在乳腺的整个发育过程中 经典的形态学检测主要应用光学显微镜、荧光 都伴随着细胞凋亡的发生，这包括胚胎发育时的 显微镜和电子显微镜对凋亡细胞的形态特征进行观 乳房主导管的管道化、经末端乳芽的乳房导管快 察，大多采用组织切片染色或石蜡切片原位末端标