MSCsHA及TGF-β1复合移植修复退变椎间盘的实验研究.pdfVIP

坐丕匡蕴!!Q2生箜!!鲞箜望塑 MSCs／HA及TGF—p1复合移植修复退变 椎间盘的实验研究 金鹏，刘亚，刘儒森 (雄坊医学院附属医院，山东潍坊261031) 用永台氯醛进行麻爵，尾髓内分别注入骨髓问充质干细胞(MSCs)／透明质酸(HA)、HA／转化生长因子一乳(TC．F一 吼)、MSCvHA和HA／TGF-13．复合物，观察各组椎闻盘组织形态学及免疫组织化学染色情况。结果移植修复术后 C组髓核区细胞密度、PC和Ⅱ型胶原含量均显著高于其他三组，P(0．01或0．05；BrdU染色阳性细胞数随时间推 移而减少。认为MSCt∥HA及TGF-13。复合移植修复退变椎间盘近期效果确切。 【关键词】骨髓间充质干细胞；退变椎间盘；组织工程 【牢圈分类号】B681．5【文献标识码】 B 【文章编号j 1002-266X[2007)29-0ff28-03 椎间盘退变是导致下腰痛最主要的原因，严重 白酶消化，当细胞回缩、变圆，间隙增大时，立即加入 影响人们的生活质量。传统的治疗方法(保守治疗 和手术治疗)可在一定程度上缓解临床症状，但不能 使其分散成单个细胞，调整细胞浓度，按照1：2传代 根本解决问题，且会产生并发症，理想的治疗方法是 培养，每3d换液1次。 2．2 修复退变椎间盘。2007年6月，我们观察了骨髓间 充质干细胞(MSCs)／透明质酸(HA)及转化生长因记的三代MSCs，以0．25％胰酶消化后，制成细胞悬 000r／mln×5 液，离心1 mln，弃上清，余约0．1ml细 子．13，(TGF—B。)复合移植修复鼠退变椎间盘的效果， 旨在为临床利用组织工程技术治疗椎间盘退变提供 胞悬液与覆先以1：0．5混合的透明质酸／DMEM(含 ml 理论依据。 10％FBS)0．15ml及0．1TGF—B，的相复合。同 1材料 样方法制作MSCs／HA、HA／TGF-13，混合物。 普通级雄性sD大鼠60只，6周龄，体质量3502．3椎问盘退变模型制作及动物处理按照Lind． —400 biota折尾加压法制作大鼠尾椎椎问盘退变模型，造 g(潍坊医学院动物中心提供)；COz培养箱 模时间2周。将60只椎间盘退变模型大鼠随机分 (美国Heraeus公司)，透明质酸水凝胶(山东正大福 瑞达公司)。DMEM培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、为A、B、C、D四组各15只。各组均用水合氯醛进行 麻醉，剪去鼠毛，消毒后在大鼠尾应力集中处试探性 TGF．B，(美国Sigma公司)，Ⅱ型胶原单克隆抗体、 SABC试剂盒(武汉博士德公司)。鼠抗人5·溴脱氧进针(进针途径尽量与水平面呈垂直方向)。感觉有 一突破感时针头已突破纤维环，进入髓核区域。此 尿嘧啶核苷(BrdU)抗体、兔抗鼠BrdU二抗(北京中 杉生物技术公司)。 2方法 2．1 MSCs细胞培养及传代取6周龄左右SD大 预留一段空气，注人细胞复合材料前先将空气注入 鼠脱颈处死。无菌操作分离出胫、股骨，放人75％酒 椎闻盘中央部，使后者在接纳细胞复合物前获得适 精中浸泡，无菌止血钳剪开股骨、胫骨两端．5号针头 当扩张以预备足够空间)，推注药物同时缓慢将针头 吸取DMEM培养基反复冲洗骨髓腔，将骨髓冲至培抽出，药物完全注人后适当按压穿刺孔．涂以抗生素 养瓶中，置37℃、5％C02、饱和湿度条件下培养，分药膏；D组不做处理，混合饲养。 别于培养