鸡AvBD6抗沙门氏菌的表达筛选与抗菌特性分析.pdfVIP

AnhuiAgricultural University AnhuiAgricultural University AAnnhhuuiiAAggrriiccuullttuurraallUUnniivveerrssiittyy Master Dissertation The antimicrobial potential of chicken AvBD6 screened on the basis of Salmonellaresistance Candidate： Wen Jun-liu Supervisor： Qi Ke- zong Academic Degree applied for： Master of Agricutural Major： Basic Veterinary Science Direction： Animal Pathology and Biological Prevention College： Animal Science and Technology June 2013 II 摘要 鸡白痢沙门氏菌（Salmonellapullorum，S.pullorum）是危害养鸡业最严重的 肠道病菌之一。研究β-防御素（Avian β-defensins，AvBDs）的鸡肠道表达调控并 筛选抗鸡白痢沙门氏菌感染的的优势AvBD 具有重要意义。 本研究通过建立鸡白痢沙门氏菌感染模型，筛选抗鸡白痢沙门氏菌感染的优 β- β- 势 防御素，利用生物信息学软件对优势 防御素进行抗菌特性的构效分析，并 为提高其生物选择活性对其进行分子设计，具体内容和结果如下： 1AvBD6 1AvBD6 11AAvvBBDD66抗鸡白痢沙门氏菌感染的表达筛选 建立鸡白痢沙门氏菌感染罗曼雏鸡动物模型，于感染24 h 内（0 h，3 h，6 h， 12 h 和24 h）采集十二指肠组织，应用实时荧光定量PCR 检测AvBDs1-14 个基 因在感染过程中的表达，结果显示鸡白痢沙门氏菌感染的 24 h 内，AvBD1、3 和12 的表达水平没有检测到显著变化；AvBD8、10、11、13 和14 的表达水平 在不同时间段显著（P＜0.05）下降；AvBD2、4、5、6、7 和9 的表达水平在不 同时间段显著上升（P＜0.05），其中AvBD6 的表达水平升高幅度最大，且在感 染24 h 表达水平最高。 2AvBD6 2AvBD6 22AAvvBBDD66抗菌特性的构效分析 选取AvBD6 为抗鸡白痢沙门氏菌感染的优势鸡β-防御素，对其进行抗菌特 性分析和 DNA/RNA-AvBD6 凝胶阻滞实验。物化特性和跨膜特性分析表明 AvBD6 具有阳离子和双亲性并且AvBD6 的抑菌靶点位于细菌胞质内；结构分析 表明AvBD6 没有α螺旋螺旋和双亲结构域，说明AvBD6 的细菌细胞膜作用能力 相对较差；凝胶阻滞实验证明AvBD6 可以结合鸡白痢沙门氏菌的DNA 和RNA 。 AvBD6 AvBD6 3 AAvvBBDD66的分子设计 在AvBD6 构效分析的基础上，对其进行AvBD6 分子设计，以加强细菌细胞 膜作用能力，降低了等电点，增强生物活性选择性为目的，用天冬氨酸在AvBD6 的PSS 位点替换了AvBD6 的中性氨基酸，并在C 端增加了抗菌肽BF2 衍生物的 α-螺旋，获得了同时拥有三个β-折叠和一个α-螺旋结构的AvBD6-BF2 设计肽。 以上实验表明，AvBD6 为抗鸡白痢沙门氏菌感染的优势鸡β- 防御素且 AvBD6 具有结合鸡白痢沙门氏菌DNA 和RNA 的能力；为提高AvBD6 的杀菌特 异性，获得了结构合理的设计肽AvBD6-BF2。本研究为AvBD6 替代抗生素有效 治疗鸡