马钱子LD50的测定2.pptVIP

马钱子 马钱子是马钱科植物马钱的干燥成熟种子。马钱子含有多种生物碱, 主要为番木鳖碱 (士的宁, strychni ne)和马钱子碱。士的宁是马钱子的主要毒性成分,对整个中枢神经系统有兴奋作用。马钱子中毒症状为不安、惊厥、抑制、死亡，20-30min可恢复正常，一般观测30min。 马钱子的毒性 毒副作用：马钱子含生物碱约2%～5%，主要是番木鳖碱(士的宁)和马钱子碱。 士的宁：约占总生物碱的45%，是主要有效成分也是有毒成分。成人口服5～10mg/次可发生中毒现象，30mg/次可致死亡。 马钱子碱：小鼠腹腔注射半数致死量(LD50)为55.23mg/kg，灌胃给药LD50为189.88mg/kg。 中毒机理：被认为是作用于脊髓，兴奋其反射功能，引起感觉器官敏感，调节大脑皮层兴奋和抑制过程，提高横纹肌、平滑肌和心肌的张力，终致强直性惊厥，最后可因呼吸麻痹而致死。 马钱子的毒性 经炮制的马钱子的粗生物碱的急性毒性均显著减少，其小鼠LD50值波动范围较小，为2.18~2.57mg/kg，而未炮制的马钱子粗生物碱的LD50为1.21mg/kg。 经砂烫、油炸等方法炮制过的马钱子LD50和生品比较则下降了48.5%～52.2%。 马钱子各种炮制品的毒性只占生品的15.5%～51.5%。 实验目的 研究马钱子的毒性范围，测定其LD50值。 掌握改良寇氏法对实验结果进行处理。 学习和了解药物半数致死量（LD50）的概念、测定方法、步骤及计算过程。理解其药理学意义。 实验原理 LD50是药物、毒物等毒性作用强度的一个标志，是指在一定条件下，使半数动物出现死亡的剂量，是描述药物安全性的指标之一。 实验原理 LD50越大，其毒性越小。 测定LD50的方法有很多，如目测机率单位法、加权机率单位法（Bliss氏法）、累计法、序贯法及寇氏法等。 寇氏法较常用，计算简便，结果较准确。 实验材料 实验动物： 小白鼠16只 雌雄各半 体重相近 实验禁食12h 不禁水 实验材料 实验器材： 实验材料 实验药品： 马钱子水煎液（2mg/ml）， 苦味酸 实验方法 预备实验： （1）摸索上下限： 定义：即用少量动物粗摸索出使全部动物死亡的最小剂量（LD100/Dm）和无一动物死亡的最大剂量（ LD0/Dn ）。 实验方法 （2）等比溶液配制： A、确定组数、组间剂量比（r）： 组数（n）：7组 按公式求公比r： 实验方法 实验方法 配液:等比稀释法 并使每只动物在给药容量上相等 实验方法 正式试验： （1）取小白鼠70只，雌雄各半，称重，随机分成7组，每组10只，标记； （2）给药后观察记录1小时内小鼠死亡数（呼吸停止），并记录中毒症状； 数据的记录与处理 数据的记录与处理 数据的记录与处理 95%可信限： 数据的记录与处理 结论：动物 给药途径 药品 LD50 95 ％可信限 注意事项 药物称量、配制及给药的准确程度是本实验成功与否的关键； 观察期间室内应保持安静，减少对小鼠的刺激，以免引起惊厥，加速死亡； 注意观察中毒症状及其发生时间、死亡时间； 动物的种类、品系、体重范围、给药途径及观察时间等因素均可影响LD50的结果，故在报告中应加以说明； Bliss-Finney法 被认为是目前最精确的方法，受到我国《新药临床前毒理学研究指导原则实验原理》的推荐，计算相当复杂，应用计算机软件计算则简单易行。 1． 启动微机，运行BL-410程序，进入其数据处理选项，再进入半数致死量选项。 2． 一次输入各组剂量、动物总数、动物死亡数等相关数据。 3． 单击“计算”按钮计算LD50等参数。 * * * * 1ml注射器、电子秤、 鼠笼、电子计算器、 棉签、手套 、镊子 r=0.76 本次实验n=7, r=0.76 本次实验0.4ml/20g -0.3191 0.4796 10 3 -0.1999 0.6311 10 4 0.1576 1.4375 10 7 0.0384 1.0925 10 6 -0.0807 0.8303 10 5 -0.4383 0.3645 10 2 -0.5575 0.2770 10 1 pi 死亡率（%） 死亡动物数（只） logD=X 剂量D（mg/kg） 动物数（只） 组别 Dm：最大剂量 d：相邻两剂量（D）对数之差（取绝对值） Σpi：各组反应率（即有效率或死亡率）的总和 Pi：各组动物的死亡率（以小数表示） S ㏒ LD5