制何首乌多糖的提取纯化及抗衰老作用研究分析.pdfVIP

摘要 摘要 何首乌又称首乌,为蓼科植物何首乌 （Polygonum multiflorum Thunb.）的 干燥块根。生品性平，味苦涩，味甘，具有解毒，消痈，润肠通便的功效；而制 何首乌性温，味转甘，具有补肝肾，益精血，乌须发，强筋骨之功。目前在临床 应用中制首乌较多，生品使用较少。本论文以制何首乌作为材料，对其水溶性多 糖的提取、含量测定、分级沉淀、纯化、药理学研究等方面进行了初步的研究。 结果如下。 第一部分： 采用水提法提取了制何首乌粗多糖 （PRPM），分别研究了提取次数、提取温 度、料液比和浸提时间等因素对多糖提取得率的影响。在此基础上进行正交实验， 得到制何首乌多糖提取的最优工艺:提取温度90℃，提取时间1h，提取次数两次， 液料比为15:1。以葡萄糖为对照品，对测定制何首乌多糖含量的苯酚－硫酸法进 行了改进：5%苯酚和浓硫酸的体积比为1:4,硫酸加入量与总体积比为2:3,沸水浴 恒温15min，冷却后在490nm处检测多糖含量。改良后的方法稳定、可靠，具有良 好的线性和重复性，在此条件下测定多糖平均含量为18.39％。 第二部分： 比较了Sevag 法与三氯乙酸－正丁醇法对制何首乌粗多糖蛋白质的脱除效 果，实验表明，三氯乙酸－正丁醇法去蛋白尽管次数少，过程简单，但其效果不 及 Sevag 法，并且三氯乙酸－正丁醇法去蛋白反应比较剧烈，对多糖具有较大破 坏性，多糖损失率比较大:实验最终选用Sevag 法去蛋白。制首乌粗多糖含有大 量的色素，我们比较了不同的除色素方法，包括活性炭、过氧化氢、大孔吸附树 脂，最后选用有较好除色效果的双氧水作为制何首乌多糖的除色方法。我们以分 级醇沉法分离制何首乌多糖，醇沉浓度依次为 30%、50%、70％，得到三个组份分 别为PRPMA、PRPMB、PRPMC。将制何首乌多糖PRPMA、PRPMB、PRPMC 分别经DEAE －52 阴离子纤维素柱层析，分别用蒸馏水、0.05 -2mol/L NaCl 梯度洗脱，共得 到七种级分：PRPMA－1、PRPMA－2，PRPMB－1、PRPMB-2、PRPMB-3，PRPMC-1、 PRPMC-2；各组分再经葡聚糖凝胶G -100 柱层析进一步纯化，得到十一种组分： PRPMA－1－1, PRPMA－1－2, PRPMA－2－1, PRPMB－1－1, PRPMB－1－2, PRPMB －2－1, PRPMB－3－1, PRPMB－3－2, PRPMC－1－1, PRPMC－1－2, PRPMC－2－ 1。将其中的PRPMA－1－2、PRPMA－2－1、PRPMB－1－2、PRPMB－2－1、PRPMB －3－1、C－1－2、C－2－1 通过 Sephadex G-100 凝胶过滤法、UV 和理化检验进 行纯度鉴定，证明为均一多糖。 - 1 - 制何首乌多糖的提取纯化及抗衰老作用研究 第三部分： 用制何首乌多糖PRPMA、PRPMB、PRPMC生理盐水溶液对D-半乳糖衰老模型小 鼠灌胃。结果表明: 制何首乌多糖能较显著提高小鼠血清及脑组织中SOD活性， 降低MDA含量，此外还能显著提高正常小鼠GSH－PX血清及脑组织中的活性，同时 证明了其中PRPMB为主要活性部位。 关键词：制何首乌；多糖；提取工艺；纯化工艺；抗衰老 - 2 - 英文摘要 Study on the extraction、purification and aging- resistant of the polysaccharide from Radix Polygoni Multiflori Preparata Wang Ting （Science of Pharmaceutical Analysis ） Directed by Liang Shengwang